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辛琪

铜虫 (小有名气)

[求助] 测定昆虫体内多功能氧化酶的时候,以对硝基苯酚制作标准曲线,应该怎么做呢?

测定昆虫体内多功能氧化酶的时候,以对硝基苯酚制作标准曲线,应该怎么做呢?如何配制,配制多大的浓度呢
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ckgzp

金虫 (初入文坛)

辛琪: 回帖置顶 2013-08-02 14:55:55
像试管中分别加入0.1 mmol/L对硝基苯酚0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0 mL然后分别加入 0.5 mol/L NaOH溶液至5mL(获得0.008、0.016 、0.032 、0.048 、0.064和0.080mmol/L留个浓度对硝基苯酚)混匀,室温放置30 min,405 nm比色,即可获得浓度-OD值标曲 。

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开心每一天,奋斗每一天!
2楼2013-07-30 22:20:44
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辛琪

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by ckgzp at 2013-07-30 22:20:44
像试管中分别加入0.1 mmol/L对硝基苯酚0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0 mL然后分别加入 0.5 mol/L NaOH溶液至5mL(获得0.008、0.016 、0.032 、0.048 、0.064和0.080mmol/L留个浓度对硝基苯酚)混匀,室温放置30 m ...

谢谢你的耐心回答,还想再问你一下,测酯酶活性时,用a-乙酸萘酯做标准曲线该怎么做呢?
未来,我来
3楼2013-08-02 14:59:47
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ckgzp

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 辛琪 at 2013-08-02 14:59:47
谢谢你的耐心回答,还想再问你一下,测酯酶活性时,用a-乙酸萘酯做标准曲线该怎么做呢?...

你指的是羧酸酯酶吧!这个酶活测定原理是α-乙酸萘酯在酶液的催化下生产α-萘酚,然后显色剂显色,用分光光度计测定。所以要做的是α-萘酚的标曲。分别取0.1 mmol/L α-萘酚0、0.3、0.6、1.2、1.5、2.4和3.0 mL,在分别加入0.04 mol/L pH7.0磷酸缓冲液9.0、8.7、8.4、7.8、7.5、6.6和6.0 mL,然后各加入1mL显色剂,混匀,室温静置30 min,600 nm下测OD值。(显色剂为:1 %固蓝B盐溶液(0.10 g固蓝B盐溶解在10 mL 5 %的HCl中)和5 %十二烷基硫酸钠溶液(5.00 g十二烷基硫酸钠溶解在100 mL双蒸水中)以2:5(V:V)的比例混合,现配现用。)

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开心每一天,奋斗每一天!
4楼2013-08-03 20:44:53
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354427392

银虫 (小有名气)

请问楼主多功能氧化酶如何得来的
我想做一个有意思的人
5楼2013-08-03 23:00:25
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辛琪

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 354427392 at 2013-08-03 23:00:25
请问楼主多功能氧化酶如何得来的

虫子得到的粗酶液
未来,我来
6楼2013-08-04 10:27:59
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辛琪

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by ckgzp at 2013-08-03 20:44:53
你指的是羧酸酯酶吧!这个酶活测定原理是α-乙酸萘酯在酶液的催化下生产α-萘酚,然后显色剂显色,用分光光度计测定。所以要做的是α-萘酚的标曲。分别取0.1 mmol/L α-萘酚0、0.3、0.6、1.2、1.5、2.4和3.0 mL,在 ...

真心的谢谢你,回答的很详细。是我搞错了,是用α-萘酚做标曲。还想再咨询你一下,配0.1 mmol/L α-萘酚和0.1 mmol/L对硝基苯酚是用丙酮还是磷酸缓冲液配呢?做标曲时的PH值要和测酶的时候PH值保持一致吗?
未来,我来
7楼2013-08-04 10:43:55
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ckgzp

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 辛琪 at 2013-08-04 10:43:55
真心的谢谢你,回答的很详细。是我搞错了,是用α-萘酚做标曲。还想再咨询你一下,配0.1 mmol/L α-萘酚和0.1 mmol/L对硝基苯酚是用丙酮还是磷酸缓冲液配呢?做标曲时的PH值要和测酶的时候PH值保持一致吗?...

0.1 mmol/L α-萘酚:取0.0144 g α-萘酚,少量丙酮溶解后,用0.04 mol/L pH 7.0磷酸缓冲液定容至10 mL,用时稀释100倍。对硝基苯酚(0.1 mmol/L)取13.911 mg对硝基苯酚溶于10 mL 0.5mol/L NaOH。使用时用0.5 mol/L NaOH稀释1000倍。做标曲时是加的缓冲溶液,pH不会变化很大,这些在实验步骤里已经考虑进来了,不用再考虑pH的问题。

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开心每一天,奋斗每一天!
8楼2013-08-04 22:40:43
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辛琪

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by ckgzp at 2013-08-04 22:40:43
0.1 mmol/L α-萘酚:取0.0144 g α-萘酚,少量丙酮溶解后,用0.04 mol/L pH 7.0磷酸缓冲液定容至10 mL,用时稀释100倍。对硝基苯酚(0.1 mmol/L)取13.911 mg对硝基苯酚溶于10 mL 0.5mol/L NaOH。使用时用0.5 mol ...

十分以及肯定谢谢你,问题得到解决了。你回答的时候都没有应助,金币还没法给你,只能送红花了。
未来,我来
9楼2013-08-05 15:51:35
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我在爱左右

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 辛琪 at 2013-08-04 10:27:59
虫子得到的粗酶液...

我想问一下,为什么得到的粗酶液就是多功能氧化酶呢,而没有羧酸酯酶等,刚接触到这个实验,不是很明白为什么这样做
10楼2014-10-12 10:44:25
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