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辛琪

铜虫 (小有名气)

[求助] 测定昆虫体内多功能氧化酶的时候，以对硝基苯酚制作标准曲线，应该怎么做呢？

测定昆虫体内多功能氧化酶的时候，以对硝基苯酚制作标准曲线，应该怎么做呢？如何配制，配制多大的浓度呢
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未来，我来
1楼 2013-07-29 15:58:40
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回帖置顶 ( 共有1个 )

ckgzp

金虫 (初入文坛)
辛琪: 回帖置顶 2013-08-02 14:55:55
像试管中分别加入0.1 mmol/L对硝基苯酚0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0 mL然后分别加入 0.5 mol/L NaOH溶液至5mL（获得0.008、0.016 、0.032 、0.048 、0.064和0.080mmol/L留个浓度对硝基苯酚）混匀，室温放置30 min，405 nm比色，即可获得浓度-OD值标曲 。
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辛琪
开心每一天，奋斗每一天！
2楼2013-07-30 22:20:44
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普通回帖

辛琪

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by ckgzp at 2013-07-30 22:20:44
像试管中分别加入0.1 mmol/L对硝基苯酚0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0 mL然后分别加入 0.5 mol/L NaOH溶液至5mL（获得0.008、0.016 、0.032 、0.048 、0.064和0.080mmol/L留个浓度对硝基苯酚）混匀，室温放置30 m ...

谢谢你的耐心回答，还想再问你一下，测酯酶活性时，用a-乙酸萘酯做标准曲线该怎么做呢？
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未来，我来
3楼2013-08-02 14:59:47
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ckgzp

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 辛琪 at 2013-08-02 14:59:47
谢谢你的耐心回答，还想再问你一下，测酯酶活性时，用a-乙酸萘酯做标准曲线该怎么做呢？...

你指的是羧酸酯酶吧！这个酶活测定原理是α-乙酸萘酯在酶液的催化下生产α-萘酚，然后显色剂显色，用分光光度计测定。所以要做的是α-萘酚的标曲。分别取0.1 mmol/L α-萘酚0、0.3、0.6、1.2、1.5、2.4和3.0 mL，在分别加入0.04 mol/L pH7.0磷酸缓冲液9.0、8.7、8.4、7.8、7.5、6.6和6.0 mL，然后各加入1mL显色剂，混匀，室温静置30 min，600 nm下测OD值。（显色剂为：1 %固蓝B盐溶液（0.10 g固蓝B盐溶解在10 mL 5 %的HCl中）和5 %十二烷基硫酸钠溶液（5.00 g十二烷基硫酸钠溶解在100 mL双蒸水中）以2:5（V:V）的比例混合，现配现用。）
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辛琪
开心每一天，奋斗每一天！
4楼2013-08-03 20:44:53
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354427392

银虫 (小有名气)
请问楼主多功能氧化酶如何得来的
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我想做一个有意思的人
5楼2013-08-03 23:00:25
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辛琪

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 354427392 at 2013-08-03 23:00:25
请问楼主多功能氧化酶如何得来的

虫子得到的粗酶液
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未来，我来
6楼2013-08-04 10:27:59
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辛琪

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by ckgzp at 2013-08-03 20:44:53
你指的是羧酸酯酶吧！这个酶活测定原理是α-乙酸萘酯在酶液的催化下生产α-萘酚，然后显色剂显色，用分光光度计测定。所以要做的是α-萘酚的标曲。分别取0.1 mmol/L α-萘酚0、0.3、0.6、1.2、1.5、2.4和3.0 mL，在 ...

真心的谢谢你，回答的很详细。是我搞错了，是用α-萘酚做标曲。还想再咨询你一下，配0.1 mmol/L α-萘酚和0.1 mmol/L对硝基苯酚是用丙酮还是磷酸缓冲液配呢？做标曲时的PH值要和测酶的时候PH值保持一致吗？
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未来，我来
7楼2013-08-04 10:43:55
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ckgzp

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 辛琪 at 2013-08-04 10:43:55
真心的谢谢你，回答的很详细。是我搞错了，是用α-萘酚做标曲。还想再咨询你一下，配0.1 mmol/L α-萘酚和0.1 mmol/L对硝基苯酚是用丙酮还是磷酸缓冲液配呢？做标曲时的PH值要和测酶的时候PH值保持一致吗？...

0.1 mmol/L α-萘酚：取0.0144 g α-萘酚，少量丙酮溶解后，用0.04 mol/L pH 7.0磷酸缓冲液定容至10 mL，用时稀释100倍。对硝基苯酚（0.1 mmol/L）取13.911 mg对硝基苯酚溶于10 mL 0.5mol/L NaOH。使用时用0.5 mol/L NaOH稀释1000倍。做标曲时是加的缓冲溶液，pH不会变化很大，这些在实验步骤里已经考虑进来了，不用再考虑pH的问题。
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辛琪
开心每一天，奋斗每一天！
8楼2013-08-04 22:40:43
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辛琪

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by ckgzp at 2013-08-04 22:40:43
0.1 mmol/L α-萘酚：取0.0144 g α-萘酚，少量丙酮溶解后，用0.04 mol/L pH 7.0磷酸缓冲液定容至10 mL，用时稀释100倍。对硝基苯酚（0.1 mmol/L）取13.911 mg对硝基苯酚溶于10 mL 0.5mol/L NaOH。使用时用0.5 mol ...

十分以及肯定谢谢你，问题得到解决了。你回答的时候都没有应助，金币还没法给你，只能送红花了。
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未来，我来
9楼2013-08-05 15:51:35
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我在爱左右

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 辛琪 at 2013-08-04 10:27:59
虫子得到的粗酶液...

我想问一下，为什么得到的粗酶液就是多功能氧化酶呢，而没有羧酸酯酶等，刚接触到这个实验，不是很明白为什么这样做
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10楼2014-10-12 10:44:25
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