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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 色谱柱的选择，水相调pH置7.9，是否可以选用pH范围2-9的色谱柱？
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flycpu

新虫 (小有名气)

[交流] 色谱柱的选择，水相调pH置7.9，是否可以选用pH范围2-9的色谱柱？

水相调pH置7.9，水相：有机相=65：35，整体pH7.5左右，先选用一根pH2-9的色谱住，分离效果均较好，但是连续实验3-5天，柱效会有所下降，冲一冲也就好了，可以继续做下去吗？
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1楼 2013-07-27 18:59:40
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haill005

金虫 (正式写手)
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flycpu: 金币+1 2013-07-29 12:38:18
???????:
2?: Originally posted by yurong1000 at 2013-07-27 22:25:51
?????????????????????????е??????????????л????????棬???黻????????

你好，想请教一下，水相比例具体是怎么规定的？我们平常实验都用到 70：30 了阿

[ ????С??????? ]
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5楼2013-07-28 08:51:53
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yurong1000

至尊木虫 (著名写手)
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flycpu(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢参与 2013-07-27 23:58:41
可以是可以，就是你的水相的比例有点太高了，如果用的有机相是乙腈，建议换成甲醇试试
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2楼2013-07-27 22:25:51
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cpu40

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by yurong1000 at 2013-07-27 22:25:51
可以是可以，就是你的水相的比例有点太高了，如果用的有机相是乙腈，建议换成甲醇试试

65%的水相还高？？？
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4楼2013-07-28 08:48:56
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浮生曲

新虫 (初入文坛)
没什么问题
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6楼2013-07-28 08:56:19
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News

专家顾问 (职业作家)
★ ★
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flycpu: 金币+1 2013-07-29 12:38:36
可能在混合后流动相的pH发生了些许改变，例如上升，
两个方法：1、加大缓冲液浓度，提高缓冲液的缓冲能力，不过一般缓冲盐的浓度不会超过50mmmol，超过了稳定性和重现性不太好----书籍，我自己还没试过。
          2.买根pH范围宽的色谱柱，Agilent 的ZORBAX Extend-c18/8系列的范围很宽  2~11.5   
另外，色谱柱的正常使用与维护对于色谱柱的寿命十分重要。
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7楼2013-07-28 13:42:12
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duliuhui

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉PH没什么问题，平时做完及时冲洗色谱柱就好。先用不含盐的流动相过渡除盐，再用纯有机相冲洗柱子。
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8楼2013-07-28 15:37:26
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linglingF8

金虫 (正式写手)
★ ★
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flycpu: 金币+1 2013-07-29 12:36:43
告知：你这个方法必然会损坏柱子，研发是需要成本的，我们用WatersT3柱一根要8000多，一个项目下来20多根也非常正常的。看你们这个品种有没有这个潜力需不需要这样投入。不要相信卖柱子的，好柱子是会有一定的区别的，但是对于目前这种研发强度他们的柱子是完全受不了的。想想怎么样改善方法吧!!
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9楼2013-07-29 10:56:49
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flycpu

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-07-29 10:56:49
告知：你这个方法必然会损坏柱子，研发是需要成本的，我们用WatersT3柱一根要8000多，一个项目下来20多根也非常正常的。看你们这个品种有没有这个潜力需不需要这样投入。不要相信卖柱子的，好柱子是会有一定的区别的 ...

已经用这根柱子做方法学了 怎么办 现在用的是安捷伦ZORBAX Eclipse Plus 色谱柱 柱效拖尾因子都可以 就是柱效下降的快 每次用完要好好的冲 然后会恢复一点 不知道怎么办了
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10楼2013-07-29 11:18:40
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flycpu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by duliuhui at 2013-07-28 15:37:26
感觉PH没什么问题，平时做完及时冲洗色谱柱就好。先用不含盐的流动相过渡除盐，再用纯有机相冲洗柱子。

我也希望如此
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11楼2013-07-29 12:37:03
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flycpu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by News at 2013-07-28 13:42:12
可能在混合后流动相的pH发生了些许改变，例如上升，
两个方法：1、加大缓冲液浓度，提高缓冲液的缓冲能力，不过一般缓冲盐的浓度不会超过50mmmol，超过了稳定性和重现性不太好----书籍，我自己还没试过。
        ...

混合后的pH 7.5左右
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12楼2013-07-29 12:38:06
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mafansile

铜虫 (小有名气)
★
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pH2~9的柱子适合的范围其实是在7以下的，7以上也可以用，就是坏的快一点
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13楼2013-07-29 14:56:07
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linglingF8

金虫 (正式写手)
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10楼: Originally posted by flycpu at 2013-07-29 11:18:40
已经用这根柱子做方法学了 怎么办 现在用的是安捷伦ZORBAX Eclipse Plus 色谱柱 柱效拖尾因子都可以 就是柱效下降的快 每次用完要好好的冲 然后会恢复一点 不知道怎么办了...

不管他，没办法你开发的这个方法最好的话哪还管他呢，我们经常会遇到这种情况，Waters的柱子要比安捷伦的好一点。要一个耐碱的
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14楼2013-07-29 17:18:12
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flycpu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-07-29 17:18:12
不管他，没办法你开发的这个方法最好的话哪还管他呢，我们经常会遇到这种情况，Waters的柱子要比安捷伦的好一点。要一个耐碱的...

药典的一个方法 要求的是菲罗们luna的C18 因为当时实验室没有 用了根实验室已有的 做出来柱效峰形分离度都很好 就一直用下去了 现在2-3天连续做实验的话 第一天15000柱效到第三天就剩12000了 哎 而且有一根柱子拖尾因子增加了很多 正活化呢 不懂能不能用了 现在就两根换着用
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15楼2013-07-29 17:58:52
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飞燕-五星岩

金虫 (小有名气)
★
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表示同情，我还比你惨，我那条件还比你的苛刻！我都快被逼疯了
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16楼2013-07-29 20:28:42
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sjz_zhaonan

木虫 (小有名气)
★
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我们pH9的流动相也用的pH2-9的柱子。用完一定要好好冲洗，否则柱效下降很快。
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17楼2013-07-29 22:40:38
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linglingF8

金虫 (正式写手)
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15楼: Originally posted by flycpu at 2013-07-29 17:58:52
药典的一个方法 要求的是菲罗们luna的C18 因为当时实验室没有 用了根实验室已有的 做出来柱效峰形分离度都很好 就一直用下去了 现在2-3天连续做实验的话 第一天15000柱效到第三天就剩12000了 哎 而且有一根柱子拖尾 ...

菲罗们luna的C18 5.0μm的才2000，3.5μm的才2500。如果是法定方法，人家用这个放必定有人家的道理呀，CDE的老师，特别喜欢有标准的方法。将性高是会把柱子上的键合基融掉，因此很难修复。不像亲水柱努努力可以恢复个10%
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18楼2013-07-30 13:51:33
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linglingF8

金虫 (正式写手)
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15楼: Originally posted by flycpu at 2013-07-29 17:58:52
药典的一个方法 要求的是菲罗们luna的C18 因为当时实验室没有 用了根实验室已有的 做出来柱效峰形分离度都很好 就一直用下去了 现在2-3天连续做实验的话 第一天15000柱效到第三天就剩12000了 哎 而且有一根柱子拖尾 ...

刚才仔细看了一下，2-3天连续用？，白天8小时工作用，这根拿去冲洗，用另外一根。
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19楼2013-07-30 13:54:42
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caff

铁杆木虫 (正式写手)
★
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ZORBAX Extend系列的范围是没有C8的，只有C18，另外waters X-Bridge，和X-terra系列也是耐碱的，
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20楼2013-07-30 16:04:53
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flycpu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-07-30 13:51:33
菲罗们luna的C18 5.0μm的才2000，3.5μm的才2500。如果是法定方法，人家用这个放必定有人家的道理呀，CDE的老师，特别喜欢有标准的方法。将性高是会把柱子上的键合基融掉，因此很难修复。不像亲水柱努努力可以恢复 ...

他给我报价3000左右呢 安捷伦柱子买了还要4000 因为听说菲罗们的不太好用 当时就没买 现在有点小后悔了 USP显示品牌是luna
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21楼2013-07-30 17:08:02
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flycpu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-07-30 13:54:42
刚才仔细看了一下，2-3天连续用？，白天8小时工作用，这根拿去冲洗，用另外一根。...

有时候连续个40-50小时 太费了 以后不能这么做了
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22楼2013-07-30 17:08:59
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yingying15883楼
2013-07-27 22:52   回复  
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