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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于双酶切
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

[求助] 关于双酶切

双酶切切出5条带有哪些原因？
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好好做实验！
1楼 2013-07-27 16:22:27
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孙妙妙: 金币+1 2013-07-28 16:22:12
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-07-28 17:10:39
楼主给的信息太少了...
不管怎样, 多数情况下酶切结果怪异(特别是切质粒)都是DNA被污染造成的.
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2楼2013-07-27 20:07:29
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-27 21:42:24
孙妙妙: 金币+1 2013-07-28 16:22:21
样品不纯
酶被污染
存在多个酶切位点（突变导致）
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互助互励，共奋共进！！
3楼2013-07-27 21:12:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孙妙妙: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-28 16:23:09
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-07-28 17:10:50
1. 载体上有多个酶切位点
2. 酶用量太大或者酶切条件不合适，造成星活性
3. 酶切不完全，有没有切开的质粒条带

建议：
1. 跑未做酶切的空质粒、分别单酶切的对照
2. 质粒定浓度，完全按照质粒用量来建立酶切体系（20μl酶切体系里切1μg质粒，并按照这个用量来加酶），酶和质粒都不要太多。
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4楼2013-07-27 23:15:07
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taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孙妙妙: 金币+1 2013-07-28 16:23:41
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-07-28 17:10:59
楼主你的酶切位点在你的目的序列里面是不是存在啊，你是如何分析你的序列里面的酶切位点的啊，给你一个网站分析就知道了啊http://tools.neb.com/NEBcutter2/
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5楼2013-07-28 02:19:45
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biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孙妙妙: 金币+2, ★有帮助, 谢谢，我看下 2013-07-28 16:24:00
gyesang: 金币+1, 正解！ 2013-07-28 17:11:10
本帖内容被屏蔽
6楼2013-07-28 11:03:59
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孙妙妙

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by taojun at 2013-07-28 02:19:45
楼主你的酶切位点在你的目的序列里面是不是存在啊，你是如何分析你的序列里面的酶切位点的啊，给你一个网站分析就知道了啊http://tools.neb.com/NEBcutter2/

这个我都有分析的，谢谢
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好好做实验！
7楼2013-07-28 16:23:32
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
如果切得是质粒，那么有可能是提取质粒时（开环、线型、超螺旋三种），线型质粒在两个酶切位点外侧断裂，导致双酶切出现多条带。
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8楼2013-07-30 11:13:27
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丹丹317

金虫 (初入文坛)
双酶切后质粒会出现三种不同的形态，有超螺旋的、还有线性的，当链被打开后，长度就会边长，就会跑的比较慢了，跑的最快的是超螺旋，然后是开环、线性的。希望对你有帮助
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fighting
9楼2013-07-31 09:44:47
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