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雪空凌

银虫 (初入文坛)

[求助] 测序测不出来,求大侠帮忙,急急。。。

我的载体是cosmid载体,插入片段是30-40kb 插入片段可能有重复区,但我的引物是在非重复区设计的,250bp左右,质粒浓度大概是100ng/ul, 做pcr可以有条带,测序是正确的,可用上下游引物双向测序,送了两个公司都说没信号,测不出来,这种情况是什么原因呢,有没有人测过这种情况知道哪家公司可以测出来,我改怎样解决,着急毕业,求好心人帮忙。。。
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在最困难的时候就是最接近成功的时候,不可以放弃
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雪空凌

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by gyesang at 2013-07-26 16:58:08
质粒有小抽试剂盒,这个抽的量比较小,也有个中抽,大抽试剂盒,大抽比较麻烦,中抽就是介于小抽与大抽之间,有专门的kit,起始菌量可以大些,柱子的吸附容量也很大,如果想质粒浓度高些,可以适当缩小点洗脱体积...

en  明白了 谢谢
在最困难的时候就是最接近成功的时候,不可以放弃
9楼2013-07-26 18:55:42
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
雪空凌: 金币+5 2013-07-26 11:25:29
首先你说上下游引物双向测序是要分开的呵,上下游引物不能混一起,要单独。
根据你的情况,问题应该在于你的质粒太小,浓度太低。所以导致测序没信号。
要找有经验的测序公司,跟他们技术沟通。提取高浓度的质粒。
伟大航线....
2楼2013-07-26 10:50:54
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雪空凌

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2013-07-26 10:50:54
首先你说上下游引物双向测序是要分开的呵,上下游引物不能混一起,要单独。
根据你的情况,问题应该在于你的质粒太小,浓度太低。所以导致测序没信号。
要找有经验的测序公司,跟他们技术沟通。提取高浓度的质粒。

质粒太小吗?
在最困难的时候就是最接近成功的时候,不可以放弃
3楼2013-07-26 11:28:10
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雪空凌

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2013-07-26 10:50:54
首先你说上下游引物双向测序是要分开的呵,上下游引物不能混一起,要单独。
根据你的情况,问题应该在于你的质粒太小,浓度太低。所以导致测序没信号。
要找有经验的测序公司,跟他们技术沟通。提取高浓度的质粒。

我直接提出来的质粒浓度只有20ng/ul,后来我把质粒用冷冻干燥机浓缩了,送去测序,这样做可以吗
在最困难的时候就是最接近成功的时候,不可以放弃
4楼2013-07-26 11:42:35
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