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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 用ellman法测定面粉中的二硫键
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bella王晶晶

银虫 (初入文坛)

[交流] 用ellman法测定面粉中的二硫键 已有7人参与

用ellman法测定蛋白质中的二硫键，我几乎没有测成功过，不知道问题出在 哪里，中英文文献都看过，还是不成功，求助大师们
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1楼 2013-07-25 18:19:42
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wuxiao549

禁虫 (著名写手)
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4楼2013-07-25 21:20:52
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煜，莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹
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引用回帖:
2楼: Originally posted by wuxiao549 at 2013-07-25 19:20:54
我也做过蛋白质中二硫键的测定，成功了倒是没问题，就是不会计算，算不出二硫键到底有多少，楼主看看中文吧，有的还是比较详细的。。

用公式呗，先测未还原二硫键前的总巯基，后测还原后的总巯基，
（后者-前者）/2 即为二硫键的量。 注意实验时 显色液较加样量稀释倍数(D值)，以及进入显色剂前样品蛋白质浓度(C mg/ml).
公式 SH=73.53*A412*D/C  (单位：umol/g protein)
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努力努力，奋斗奋斗！
6楼2013-07-28 10:08:49
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翘楚映象

新虫 (初入文坛)
★
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原理是什么呢？是生成新物质？还是测浑浊度？？
最近一直在测，扫了全波长，412nm处没有峰呢？？
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8楼2014-07-05 13:42:14
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wuxiao549

禁虫 (著名写手)
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2楼2013-07-25 19:20:54
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bella王晶晶

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuxiao549 at 2013-07-25 19:20:54
我也做过蛋白质中二硫键的测定，成功了倒是没问题，就是不会计算，算不出二硫键到底有多少，楼主看看中文吧，有的还是比较详细的。。

我们有好几个同学都测了二硫键结构非常不稳定，不知道问题出在哪里，完全是参考ELLMAN‘S试剂比色法测定食品中蛋白质的巯基和二硫键（罗明江）这篇文献来操作的，可是结果总是游离的巯基量大于总巯基量，不知道问题出在哪里了？特别着急现在
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3楼2013-07-25 20:41:34
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煜，莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹
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同感啊~ 小虫测的结果也与方法相悖，（总巯基会上升，则表明此法还未完全测得所需要的巯基）。4L的改进我也看过，大家应用此法的时候，都应该针对自己的样品做出改进。 最好从原理着手，一味的照搬恐怕不行了。 据我查阅文献，此法显色剂以及显色条件都有在拓展（针对不同蛋白质）和改进。
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努力努力，奋斗奋斗！
5楼2013-07-28 09:50:57
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sdzhangfm007

新虫 (初入文坛)
学习了
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7楼2013-09-26 10:55:04
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煜，莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹
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引用回帖:
8楼: Originally posted by 翘楚映象 at 2014-07-05 13:42:14
原理是什么呢？是生成新物质？还是测浑浊度？？
最近一直在测，扫了全波长，412nm处没有峰呢？？

中性到碱性环境生成黄色络合物，朗伯比尔定律；
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努力努力，奋斗奋斗！
9楼2014-07-07 19:16:04
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
★
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请教各位，那个稀释倍数是怎么算出来的啊，不大明白D是”显色液较加样量稀释倍数“？
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10楼2014-08-28 16:09:31
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