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liliinjn

金虫 (小有名气)

[求助] 请问哪可以做分子量为14KDa蛋白的N端测序

RT, 请问哪可以做分子量为14KDa蛋白的N端测序, 分子量这么大的真的不能N端测序吗?那应该怎样知道它的一级结构啊。
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 20:57:34
liliinjn: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-07-25 21:20:08
1、14KDa只是一个小蛋白;
2、N端测序和蛋白分子量没有关系,能不能测出来和蛋白的纯度、N端是否封闭和修饰有关;
3、一个N端测序并不能鉴定蛋白的一级结构。
2楼2013-07-25 19:29:16
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liliinjn

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-25 19:29:16
1、14KDa只是一个小蛋白;
2、N端测序和蛋白分子量没有关系,能不能测出来和蛋白的纯度、N端是否封闭和修饰有关;
3、一个N端测序并不能鉴定蛋白的一级结构。

谢谢,可是我今天打电话到生工生物,说N端测序一般只能测20个氨基酸以内的,20个以后的就测不出来了。
还有,请教一下跑SDS-PAGE 能看出条带基本单一,但是还有一些很浅很浅的杂带,能不能达到纯度要求啊?
另外,为什么说一个N端测序不能鉴定蛋白的一级结构?
3楼2013-07-25 21:19:34
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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liliinjn(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-26 09:04:09
liliinjn: 金币+9, ★★★★★最佳答案 2013-07-26 19:17:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by liliinjn at 2013-07-25 21:19:34
谢谢,可是我今天打电话到生工生物,说N端测序一般只能测20个氨基酸以内的,20个以后的就测不出来了。
还有,请教一下跑SDS-PAGE 能看出条带基本单一,但是还有一些很浅很浅的杂带,能不能达到纯度要求啊?
另外 ...

杂带离目的条带远的话没问题,因为N端测序前要切胶转膜的。另外,偷懒的方法:判断能不能达到纯度要求的方法,你把电泳图发给生工,他们会判断的。
至于为什么说一个N端测序不能鉴定蛋白的一级结构,正如你上面所说的,现在的技术N端测序一般只能测20个氨基酸以内的,20个以后的就测不出来了,而蛋白质都是上百个氨基酸残基,所以不能鉴定出蛋白完整的一级结构。
4楼2013-07-26 07:28:52
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guoyanfei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-26 09:04:18
liliinjn: 金币+10 2013-07-26 19:17:07
有做N端测序的钱,还不如做个二级质普,
5楼2013-07-26 08:47:52
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liliinjn

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-26 07:28:52
杂带离目的条带远的话没问题,因为N端测序前要切胶转膜的。另外,偷懒的方法:判断能不能达到纯度要求的方法,你把电泳图发给生工,他们会判断的。
至于为什么说一个N端测序不能鉴定蛋白的一级结构,正如你上面所 ...

嗯 今天咨询了工程师 转膜的时候就可以选择性的去掉杂带了
谢谢了!
6楼2013-07-26 19:14:50
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liliinjn

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by guoyanfei at 2013-07-26 08:47:52
有做N端测序的钱,还不如做个二级质普,

我今天咨询了一下,因为是未知蛋白,工程师的意思好像N端测序是测定,质谱一般用来做鉴定,所以N端测序优先,如果实在测不出来再用质谱。
7楼2013-07-26 19:17:00
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
7楼: Originally posted by liliinjn at 2013-07-26 19:17:00
我今天咨询了一下,因为是未知蛋白,工程师的意思好像N端测序是测定,质谱一般用来做鉴定,所以N端测序优先,如果实在测不出来再用质谱。...

请问我如果利用大肠杆菌表达系统表达出来一个蛋白,怎么确定它的氨基酸序列呀?
8楼2015-12-06 14:38:54
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开心365

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by liliinjn at 2013-07-26 19:17:00
我今天咨询了一下,因为是未知蛋白,工程师的意思好像N端测序是测定,质谱一般用来做鉴定,所以N端测序优先,如果实在测不出来再用质谱。...

您是在生工测序的吗?N端测序结果怎么样 求推荐

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life science, that's interesting!
9楼2016-11-04 13:49:22
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