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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 请问哪可以做分子量为14KDa蛋白的N端测序
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liliinjn

金虫 (小有名气)

[求助] 请问哪可以做分子量为14KDa蛋白的N端测序

RT, 请问哪可以做分子量为14KDa蛋白的N端测序, 分子量这么大的真的不能N端测序吗？那应该怎样知道它的一级结构啊。
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1楼 2013-07-25 16:32:20
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 20:57:34
liliinjn: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-07-25 21:20:08
1、14KDa只是一个小蛋白；
2、N端测序和蛋白分子量没有关系，能不能测出来和蛋白的纯度、N端是否封闭和修饰有关；
3、一个N端测序并不能鉴定蛋白的一级结构。
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2楼2013-07-25 19:29:16
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-25 19:29:16
1、14KDa只是一个小蛋白；
2、N端测序和蛋白分子量没有关系，能不能测出来和蛋白的纯度、N端是否封闭和修饰有关；
3、一个N端测序并不能鉴定蛋白的一级结构。

谢谢，可是我今天打电话到生工生物，说N端测序一般只能测20个氨基酸以内的，20个以后的就测不出来了。
还有，请教一下跑SDS-PAGE 能看出条带基本单一，但是还有一些很浅很浅的杂带，能不能达到纯度要求啊？
另外，为什么说一个N端测序不能鉴定蛋白的一级结构？
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3楼2013-07-25 21:19:34
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
liliinjn(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-26 09:04:09
liliinjn: 金币+9, ★★★★★最佳答案 2013-07-26 19:17:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by liliinjn at 2013-07-25 21:19:34
谢谢，可是我今天打电话到生工生物，说N端测序一般只能测20个氨基酸以内的，20个以后的就测不出来了。
还有，请教一下跑SDS-PAGE 能看出条带基本单一，但是还有一些很浅很浅的杂带，能不能达到纯度要求啊？
另外 ...

杂带离目的条带远的话没问题，因为N端测序前要切胶转膜的。另外，偷懒的方法：判断能不能达到纯度要求的方法，你把电泳图发给生工，他们会判断的。
至于为什么说一个N端测序不能鉴定蛋白的一级结构，正如你上面所说的，现在的技术N端测序一般只能测20个氨基酸以内的，20个以后的就测不出来了，而蛋白质都是上百个氨基酸残基，所以不能鉴定出蛋白完整的一级结构。
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4楼2013-07-26 07:28:52
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guoyanfei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-26 09:04:18
liliinjn: 金币+10 2013-07-26 19:17:07
有做N端测序的钱，还不如做个二级质普，
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5楼2013-07-26 08:47:52
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-26 07:28:52
杂带离目的条带远的话没问题，因为N端测序前要切胶转膜的。另外，偷懒的方法：判断能不能达到纯度要求的方法，你把电泳图发给生工，他们会判断的。
至于为什么说一个N端测序不能鉴定蛋白的一级结构，正如你上面所 ...

嗯 今天咨询了工程师 转膜的时候就可以选择性的去掉杂带了
谢谢了！
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6楼2013-07-26 19:14:50
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by guoyanfei at 2013-07-26 08:47:52
有做N端测序的钱，还不如做个二级质普，

我今天咨询了一下，因为是未知蛋白，工程师的意思好像N端测序是测定，质谱一般用来做鉴定，所以N端测序优先，如果实在测不出来再用质谱。
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7楼2013-07-26 19:17:00
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liliinjn at 2013-07-26 19:17:00
我今天咨询了一下，因为是未知蛋白，工程师的意思好像N端测序是测定，质谱一般用来做鉴定，所以N端测序优先，如果实在测不出来再用质谱。...

请问我如果利用大肠杆菌表达系统表达出来一个蛋白，怎么确定它的氨基酸序列呀？
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8楼2015-12-06 14:38:54
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开心365

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liliinjn at 2013-07-26 19:17:00
我今天咨询了一下，因为是未知蛋白，工程师的意思好像N端测序是测定，质谱一般用来做鉴定，所以N端测序优先，如果实在测不出来再用质谱。...

您是在生工测序的吗？N端测序结果怎么样 求推荐

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life science, that's interesting!
9楼2016-11-04 13:49:22
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