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JamesZu

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] PCR扩增

做了两个PCR体系,一个是只加ExTaq酶,另一个是与前一个体系一样,但是加了0.01微升的KOD保真,可是只加ExTaq酶的扩出来了,但是加了保真的KOD扩不出来!请问大虾们肿么回事?
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
JamesZu(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 23:26:23
这种现象可重复么? PCR反应体系不好的话重复性是不好的, 说不准你再跑一次就都能扩出来了.
2楼2013-07-25 18:17:47
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hyphen007

金虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币-1, 应助指数-1, 违规存档, 如果不是应助的话请不要点击应助按钮,分子生物期待你的更多精彩谢谢理解 2013-07-25 23:26:41
同意楼上,PCR有时候确实很诡异
3楼2013-07-25 23:03:57
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JamesZu

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-25 18:17:47
这种现象可重复么? PCR反应体系不好的话重复性是不好的, 说不准你再跑一次就都能扩出来了.

做了两次都没有。并且对比了下,只要加KOD就扩不出来!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-07-26 08:41:46
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qming82

禁虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
JamesZu(myprayer代发): 金币+1, 鼓励积极交流发帖,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:18:55
本帖内容被屏蔽

5楼2013-07-26 11:30:38
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JamesZu

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qming82 at 2013-07-26 11:30:38
不同的扩增目的选择不同的酶;另外就是其中有没有扩增抑制物呢?如果没有后续试验的要求,只要是能得到扩增片段就好了

恩,难道是抑制物。KOD是为了保真,后续是的连接等等……只是Taq和KOD有互作的因素么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2013-07-27 10:24:54
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
两个酶加一起跑确实会有这种情况,如果你用用于克隆的话,建议你可以只用高保真酶跑,回收好产物后用加A试剂盒加下A就可以连T了,希望对你有帮助
好好做实验!
7楼2013-07-27 16:17:34
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