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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增
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JamesZu

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] PCR扩增

做了两个PCR体系，一个是只加ExTaq酶，另一个是与前一个体系一样，但是加了0.01微升的KOD保真，可是只加ExTaq酶的扩出来了，但是加了保真的KOD扩不出来！请问大虾们肿么回事？
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1楼 2013-07-25 15:53:51
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
JamesZu(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 23:26:23
这种现象可重复么? PCR反应体系不好的话重复性是不好的, 说不准你再跑一次就都能扩出来了.
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2楼2013-07-25 18:17:47
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hyphen007

金虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币-1, 应助指数-1, 违规存档, 如果不是应助的话请不要点击应助按钮，分子生物期待你的更多精彩谢谢理解 2013-07-25 23:26:41
同意楼上，PCR有时候确实很诡异
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3楼2013-07-25 23:03:57
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JamesZu

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-25 18:17:47
这种现象可重复么? PCR反应体系不好的话重复性是不好的, 说不准你再跑一次就都能扩出来了.

做了两次都没有。并且对比了下，只要加KOD就扩不出来！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-07-26 08:41:46
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qming82

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
JamesZu(myprayer代发): 金币+1, 鼓励积极交流发帖，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:18:55
本帖内容被屏蔽
5楼2013-07-26 11:30:38
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JamesZu

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qming82 at 2013-07-26 11:30:38
不同的扩增目的选择不同的酶；另外就是其中有没有扩增抑制物呢？如果没有后续试验的要求，只要是能得到扩增片段就好了

恩，难道是抑制物。KOD是为了保真，后续是的连接等等……只是Taq和KOD有互作的因素么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-07-27 10:24:54
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个酶加一起跑确实会有这种情况，如果你用用于克隆的话，建议你可以只用高保真酶跑，回收好产物后用加A试剂盒加下A就可以连T了，希望对你有帮助
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好好做实验！
7楼2013-07-27 16:17:34
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