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henghengyouyou

银虫 (正式写手)

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[交流] 除了转基因，还有其他方法进行功能鉴定么？

各位好，本人从事作物分子遗传。目前通过fine mapping分离出一single显性candidate gene,但该作物遗传转化非常非常难，即使做了也不知道什么时候能做出来，也未见报道，本实验室构建的体系也不成熟。
所以，本人想通过其他途径看看能否实现(亲本A, 亲本B)。
1. 本人在fine mapping所用到的两个离target gene最近的交换株（比如H-H-B和B-H-H），将这两个交换株(或者后代)杂交，在后代F2中会出现B-A（target gene）-B后代，如果经表型鉴定符合预期结果的话，能否证明该基因引起此表型？能否可以代替转基因？因为即使转基因的话我也是将B亲本中的target gene RNAi, 和这个BAB是一样的效果，只不过BAB材料背景可能没有A line那么纯。
2. 老板建议用我现有群体的交换株X和Aline再进行杂交，进而得到分离群体，然后再用gene specific marker 去鉴定，如果基因型表型符合，说明该基因确实具有功能。我觉得这样做和之前做的cross 一个效果，他说这个两个不同的story,请问，这样可行么？有意义么？
是否还有其他方法可以验证功能。请各位多多赐教。