19楼: Originally posted by lixtong at 2013-07-25 14:33:10
首先，连接温度上，promega的官方说明书上写的很明白，最佳连接条件是4℃过夜连接，这楼主不用纠结。
其次，连接的话，体系尽量小点，这样连接时的效率要高一些。
第三，楼主有没有找一下培养基和X-gal、iptg的原 ...

20楼: Originally posted by 王者归来001 at 2013-07-26 17:01:48
你要确定你PCR的产物是不是带有A尾巴，如果是高保真酶的话需要一步加A尾后才能连得上T载体

21楼: Originally posted by 关包子 at 2013-07-28 08:34:51
谢谢兄弟啊！我和不同人都用promega的试剂盒做了一下，都是相同的结果：对照和样品全是蓝斑，菌落数都是样品大于对照！然后我用不同的TAKARA的做了一下，还是一样的结果！最后，我取蓝斑，做了个菌落pcr，有目的条 ...

15楼: Originally posted by 关包子 at 2013-07-24 18:03:33
第一条，最后一条都明白了，第二条不是太懂，体系大小还和连接成功与否有关联吗？...

22楼: Originally posted by 关包子 at 2013-07-28 08:37:16
是biolab的one taq hot start系统，有polyA！后来菌落pcr检验，有目的条带，目的基因导入t载体中了！谢谢啊。不过我还是不知道为什么导进去了还是呈蓝斑！...