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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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关包子

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by lixtong at 2013-07-25 14:33:10
首先,连接温度上,promega的官方说明书上写的很明白,最佳连接条件是4℃过夜连接,这楼主不用纠结。
其次,连接的话,体系尽量小点,这样连接时的效率要高一些。
第三,楼主有没有找一下培养基和X-gal、iptg的原 ...

谢谢兄弟啊!我和不同人都用promega的试剂盒做了一下,都是相同的结果:对照和样品全是蓝斑,菌落数都是样品大于对照!然后我用不同的TAKARA的做了一下,还是一样的结果!最后,我取蓝斑,做了个菌落pcr,有目的条带!真的是连上啦!我怀疑是不是我的x-gal浓度的问题,x-gal浓度是20mg/ul,却150ul倒入150ml固体LB,是不是浓度高啦?
为自己的梦想而努力
21楼2013-07-28 08:34:51
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关包子

银虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by 王者归来001 at 2013-07-26 17:01:48
你要确定你PCR的产物是不是带有A尾巴,如果是高保真酶的话需要一步加A尾后才能连得上T载体

是biolab的one taq hot start系统,有polyA!后来菌落pcr检验,有目的条带,目的基因导入t载体中了!谢谢啊。不过我还是不知道为什么导进去了还是呈蓝斑!
为自己的梦想而努力
22楼2013-07-28 08:37:16
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lixtong

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 关包子 at 2013-07-28 08:34:51
谢谢兄弟啊!我和不同人都用promega的试剂盒做了一下,都是相同的结果:对照和样品全是蓝斑,菌落数都是样品大于对照!然后我用不同的TAKARA的做了一下,还是一样的结果!最后,我取蓝斑,做了个菌落pcr,有目的条 ...

X-gal是20mg/ml吧?
另外,我们实验室都是取100ul的x-gal加入到20~25ml的固体培养基里面,感觉你的好像加少了,筛选效果效果不理想。
23楼2013-07-28 10:27:51
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lloveyr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 关包子 at 2013-07-24 18:03:33
第一条,最后一条都明白了,第二条不是太懂,体系大小还和连接成功与否有关联吗?...

体系太大,转化时如果都加入感受态中会有一定影响!
24楼2013-07-30 09:39:46
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lloveyr

金虫 (正式写手)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 关包子 at 2013-07-28 08:37:16
是biolab的one taq hot start系统,有polyA!后来菌落pcr检验,有目的条带,目的基因导入t载体中了!谢谢啊。不过我还是不知道为什么导进去了还是呈蓝斑!...

这个问题我们很早就发现了,蓝白斑挑选这块几个公司的T载体都做的不是非常好,所以我们都不用蓝白斑筛选的,直接PCR鉴定。
25楼2013-07-30 09:43:08
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