24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1909  |  回复: 24

lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-24 18:37:28
4度连接,温度太低了。建议:1、加大PCR产物的用量,可以不加水,全部用PCR产物
                                         2、连接体系换用10ul或6ul(我们一般6ul),载体用0.5ul,连接酶0.5ul
                                         3、室温过夜连接,然后放入4度冰箱1小时以上再转化
T载体连接应该是非常简单的实验,你的目标片段又不长,应该是很容易连接成功的。我们按上述方法连接不用蓝白斑挑选,阳性转化率90%以上,建议你尝试,祝早日成功 !

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

11楼2013-07-24 17:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关包子

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-24 11:52:10
感觉你的片段和载体的比例拉开的并不是很大。
所以你可以适当增加pcr产物的加入量,这样水就可以省去了
其实一直觉得水不是必须的,往往可以不加...

嗯,promega上建议载体的比例是 3:1的,我是新手哈,这方面可能存在一些技巧,受教了!
为自己的梦想而努力
12楼2013-07-24 17:59:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关包子

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 光树林 at 2013-07-24 13:00:29
不是16度连接么(⊙o⊙)

4度也是可以的!要过夜连接!
为自己的梦想而努力
13楼2013-07-24 17:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关包子

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-24 16:40:53
同意楼上,连接不是16度吗???

4度可以过夜连接的,这个试剂盒上有说明哈!
为自己的梦想而努力
14楼2013-07-24 18:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关包子

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by lloveyr at 2013-07-24 17:36:26
4度连接,温度太低了。建议:1、加大PCR产物的用量,可以不加水,全部用PCR产物
                                         2、连接体系换用10ul或6ul(我们一般6ul),载体用0.5ul,连接酶0.5ul
                ...

第一条,最后一条都明白了,第二条不是太懂,体系大小还和连接成功与否有关联吗?
为自己的梦想而努力
15楼2013-07-24 18:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alicelchf

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 光树林 at 2013-07-24 13:00:29
不是16度连接么(⊙o⊙)

说明书还有30度连接的呢
这个其实是16度过夜是常用的而已
修身、齐家、治国、平天下
16楼2013-07-24 18:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关包子

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-24 18:40:53
说明书还有30度连接的呢
这个其实是16度过夜是常用的而已...

好吧,温度这个真的是五花八门哈
为自己的梦想而努力
17楼2013-07-24 19:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

关包子

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 光树林 at 2013-07-24 13:00:29
不是16度连接么(⊙o⊙)

TAKARA 是16度,promega是4度连接
为自己的梦想而努力
18楼2013-07-25 10:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixtong

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
关包子: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-28 08:37:45
首先,连接温度上,promega的官方说明书上写的很明白,最佳连接条件是4℃过夜连接,这楼主不用纠结。
其次,连接的话,体系尽量小点,这样连接时的效率要高一些。
第三,楼主有没有找一下培养基和X-gal、iptg的原因,是不是X-gal使用时浓度太高了?最好新配一下!
最后,楼主可以专门挑几个蓝色的做一下验证,我有一次做的时候挑了几个蓝色菌落也能连接上,试试吧!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

19楼2013-07-25 14:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你要确定你PCR的产物是不是带有A尾巴,如果是高保真酶的话需要一步加A尾后才能连得上T载体
坚持不懈,终会成功!
20楼2013-07-26 17:01:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 关包子 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 273求调剂 +14 麦小叮当 2026-04-06 15/750 2026-04-06 19:42 by Viky0801
[考研] 求调剂 +4 wos666 2026-04-03 5/250 2026-04-06 15:22 by wos666
[考研] 第一志愿东南大学物理313,有科研竞赛获奖经历,希望物理复试调剂 +3 马内橙 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:32 by 蓝云思雨
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +7 木子念晞 2026-04-05 7/350 2026-04-05 19:02 by chy09050039
[考研] 358求调剂 +7 秋gk 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:29 by huangmoli
[考研] 一志愿西北农林畜牧专硕336分求调剂 +3 5ourr 2026-04-03 3/150 2026-04-05 10:40 by JOKER0401
[考研] 085600调剂 +4 1amJJ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:53 by hemengdong
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 334求调剂 +9 Trying] 2026-03-31 9/450 2026-04-03 15:18 by 琢珥丶
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 土木水利328分求调剂 +6 疾风知劲草666 2026-04-02 6/300 2026-04-03 11:38 by znian
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考研] 309求调剂 +14 呆菇不是戴夫 2026-04-02 14/700 2026-04-03 09:42 by 蓝云思雨
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突, 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:16 by 兔突突突,
[考研] 08开头看过来!!! +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 348环境工程调剂 +3 吴彦祖24k 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:14 by nanaliuyun
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 合肥区域性重点一本招收调剂 +4 6266jl 2026-03-30 8/400 2026-03-31 18:43 by 6266jl
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
信息提示
请填处理意见