24小时热门版块排行榜

返回列表

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星

应助: 1 (幼儿园)
金币: 631.4
散金: 17
红花: 1
帖子: 378
在线: 82.4小时
虫号: 460911
注册: 2007-11-18
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 急！！！用PNP法测酯酶酶活对照组颜色太深怎么解决？

本人最近在用PNP法测羧酸酯酶酶活，用的底物是对硝基苯酚乙酸酯，用乙腈溶解配成10mM, 乳化缓冲液（柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，0.4%曲拉通100,0.1%阿拉伯胶），终止液0.1M碳酸钠。
反应体系：400ul乳化缓冲液，加入50ul 底物，预热5min，加入50ul酶液，37度反应5min，加入50ul 碳酸钠终止反应。对照组在加酶液的时候加入双蒸馏水，然后用碳酸钠终止。得到的实验结果是对照组颜色比实验组颜色深。在加入乳化缓冲液和底物，碳酸钠的情况下，对照组会随着反应的进行颜色加深。不知道是否跟底物的稳定性有关？我在用a-乙酸萘酯测的时候在大于PH 9.0以后，对照组也是因为颜色太深，分光光度计无法读值，请各位大侠指点如何让对照组正常或者有什么更好的方法。谢谢各位!

回复此楼