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xiezhenrong金虫 (正式写手)
北斗星
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[求助]
急！！！用PNP法测酯酶酶活对照组颜色太深怎么解决？
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本人最近在用PNP法测羧酸酯酶酶活，用的底物是对硝基苯酚乙酸酯，用乙腈溶解配成10mM, 乳化缓冲液（柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，0.4%曲拉通100,0.1%阿拉伯胶），终止液0.1M碳酸钠。 反应体系：400ul乳化缓冲液，加入50ul 底物，预热5min，加入50ul酶液，37度反应5min，加入50ul 碳酸钠终止反应。对照组在加酶液的时候加入双蒸馏水，然后用碳酸钠终止。得到的实验结果是对照组颜色比实验组颜色深。在加入乳化缓冲液和底物，碳酸钠的情况下，对照组会随着反应的进行颜色加深。不知道是否跟底物的稳定性有关？我在用a-乙酸萘酯测的时候在大于PH 9.0以后，对照组也是因为颜色太深，分光光度计无法读值，请各位大侠指点如何让对照组正常或者有什么更好的方法。谢谢各位! |
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