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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[求助] GFP定位

做植物亚细胞定位，构建载体时，目的基因插入在GFP前面，基因的终止密码子应该去掉，那么GFP的起始密码子用不用去掉呀？我的基因和GFP中间有载体上的序列，刚好翻译成十个氨基酸，这样对定位有影响没？
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1楼 2013-07-22 11:31:28
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币-1, 违规存档, 如果不是应助的话请不要点击应助按钮，分子生物期待你的更多精彩谢谢理解 2013-07-24 17:03:52
帮楼主顶起，坐等学习
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2楼2013-07-22 11:33:30
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小猫三两只(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 19:05:30
载体图谱，连好GFP的大概图谱发过来看看，翻译这几个氨基酸是哪些氨基酸，一般目的基因序列接着就是GFP，中间会有酶切位点的序列，没有载体的序列。不知道你的怎么回事？
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3楼2013-07-22 17:40:50
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
GFP是载体本身的吧，你只需要把无终止子的目的基因转进去就好了，与GFP之间有片段没关系
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越学越无知
4楼2013-07-22 19:50:01
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！ 2013-07-22 20:28:30
GFP的起始密码子去不去都可以，我也两种都弄过，都可以用。关键是连在GFP前面的基因终止密码子，去掉就好了，还有就是克隆时别带进新的终止密码子。
另外还要小心读码框，保证连接后外源基因和GFP之间多余的碱基是3的倍数，不然会造成GFP的移码。
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5楼2013-07-22 20:18:45
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oylb

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2013-07-22 20:27:25
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by oylb at 2013-07-22 13:27:25
我们的经验，GFP前去掉ATG最好，因为会有低水平的细胞质荧光定位；但是去掉ATG很费力，有则最好，专门为了一个去做就不太值得。GFP与特定蛋白之间的MCS会有一些氨基酸产生，但是设计载体的时候前人也考虑到了这些， ...

如果怕ATG影响，可以用空载体转化作为一个对照
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越学越无知
7楼2013-07-22 20:32:39
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oylb

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2013-07-22 21:09:44
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