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花小树

[交流] 求助转化

求助大家一下啊,给出个主意,
我用pmd19-T做连接,转感受态细胞,铺平板,但是长出来的菌落一直不多200左右,请教做过有经验的同学出出主意吧
恭谢大家了
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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下

做过,长出几十个,可是经IPTG、X-GAL筛选,却没有蓝斑,我想有阳性克隆就好了吧。
——穿越死亡之门,到我这里来,虽则梦想褪色,岁月集成的果实腐烂掉,但我是永恒的真理,你将再会见我,在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
6楼2007-11-09 14:57:27
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

估计是感受态不好!!
换一个试试,或做批新的用
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
2楼2007-11-01 21:31:49
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zhouyj

木虫 (正式写手)


johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
楼主如果用ligase酶连接,可以尝试常温(24度)连接,因为温度高了分子运动速度加快,碰撞机会增多,有益于连接,我曾经这样尝试过效果很好,我一直这样做的。如果用宝生物的solution I就16度1小时效果就很好
我觉得长出200多已经够多了
有朋友们的支持,在学术道路上才不会寂寞
3楼2007-11-01 21:46:13
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fw1980613

银虫 (小有名气)


johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
200个菌..........
以前我做转化,出几个就可以了,一半50%以上阳性。
后来感受态好了些出的菌也没你那么多啊。
菌多少无所谓,质量是关键,出1个就是是最佳理想
4楼2007-11-09 13:37:43
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