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花小树

[交流] 求助转化

求助大家一下啊，给出个主意，
我用pmd19-T做连接，转感受态细胞，铺平板，但是长出来的菌落一直不多200左右，请教做过有经验的同学出出主意吧
恭谢大家了
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1楼 2007-11-01 21:12:52
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
估计是感受态不好！！
换一个试试，或做批新的用
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2007-11-01 21:31:49
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zhouyj

木虫 (正式写手)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
楼主如果用ligase酶连接，可以尝试常温（24度）连接，因为温度高了分子运动速度加快，碰撞机会增多，有益于连接，我曾经这样尝试过效果很好，我一直这样做的。如果用宝生物的solution I就16度1小时效果就很好
我觉得长出200多已经够多了
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有朋友们的支持，在学术道路上才不会寂寞
3楼2007-11-01 21:46:13
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fw1980613

银虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
200个菌..........
以前我做转化，出几个就可以了，一半50%以上阳性。
后来感受态好了些出的菌也没你那么多啊。
菌多少无所谓，质量是关键，出1个就是是最佳理想
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4楼2007-11-09 13:37:43
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yellow.

你做文库吗，要那么多干嘛！
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5楼2007-11-09 13:46:16
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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下
做过，长出几十个，可是经IPTG、X－GAL筛选，却没有蓝斑，我想有阳性克隆就好了吧。
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——穿越死亡之门，到我这里来，虽则梦想褪色，岁月集成的果实腐烂掉，但我是永恒的真理，你将再会见我，在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
6楼2007-11-09 14:57:27
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
200个菌足够了
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活着就要让人感受到你的存在。
7楼2007-11-09 16:20:04
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reasonspare

木虫 (著名写手)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):谢谢斑斑,辛苦了
楼主兄弟， 我觉得最好 看看你的条件，如果是买的试剂盒，一般没有问题，
主要是的连接反应的体系问题，这个很关键，连接效率是第一位，否则就是有假阳性或者阴性克隆的存在。
此外就是转化的过程的操作，比如感受冻融时间，不要太久，等等问题。
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大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
8楼2007-11-09 17:34:39
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花小树

我做的是消减库ssh，我做的实验是大困难好像也没有，小困难不断，然后发现把过程可是细细的研究了一遍，我要长1000多个才好啊
我也有一板子长快1500左右的时候，但是现在不知道为什么老做不出来
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9楼2007-11-11 13:24:52
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