| 查看: 447 | 回复: 0 | |||
[交流]
从麻风果果仁中提取粗蛋白的实验
|
|
1 称取500 g 麻疯果果仁研碎放于2000 mL 锥形瓶，加入1000 mL PBS缓冲液浸渍放于恒温震荡器4 ℃以转速200 rpm提取24小时。后取出以纱布粗过滤得滤液，再将滤液放于高速冷冻离心机以4 ℃、16000 rpm离心20分钟，取上清液合并，弃去沉淀。上清液使用 密理博超滤机 超滤除去小分子杂质得到浓缩大分子总提物 2用盐析提纯 配95%饱和的硫酸铵溶液，将0.05 M 的pH=9.0的Tris-HCl缓冲液加入到浓缩蛋白粗提液并调节其浓度，使得蛋白质浓度大约为25~30 mg/mL，( 怎么可以观察到蛋白质的浓度以便调节？)使用氨水调节pH=9.0。逐步滴加95%饱和硫酸铵溶液，并不断搅拌，至饱和，样品放于4 ℃冷却3小时后，以12000 rpm 离心20分钟，取上清液继续滴加硫酸铵至不再生成沉淀，倒上清液，用Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，得含盐蛋白质溶液 3层析脱盐 凝胶预处理：在室温下，将Sephadex G-75干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干，放于无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后再用0.2 mol/L HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性。上柱，用Tris-HCl缓冲液冲洗柱床，加将含盐蛋白质溶液缓慢沿壁加入到柱中，待样品将要低于凝胶面时再滴加缓冲液，到液面高度超过5 cm时，可以继续用缓冲液冲洗柱子。以小流速冲洗0.5 mL/min，收集既得蛋白质样品溶液。 以上步骤就可以得到粗蛋白了？？求高手修改，指导。 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 实验方案.doc
2013-07-19 17:30:48, 12 K
» 猜你喜欢
0856材料化工调剂 总分330
已经有9人回复
-
085602 化工专硕 338分 求调剂
已经有9人回复
-
352分 化工与材料
已经有4人回复
-
求调剂
已经有8人回复
-
材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分
已经有3人回复
-
材料求调剂一志愿哈工大324
已经有4人回复
-
085600 286分 材料求调剂
已经有4人回复
-
求调剂
已经有7人回复
-
275求调剂
已经有10人回复
-
286求调剂
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
2026年赣南师范大学 电子科学与技术专业（学硕）+ 电子信息工程（专硕）接收调剂学生
+1/195
-
南方医科大学中药学院 调剂硕士生一名 中药学专业
+1/84
-
上海高校招收化学，材料，环境，化工等专业基础的同学攻读硕士研究生
+1/82
-
江南大学招收具有3年海外博后经历的青年教师
+1/80
-
中山大学附属医院实验和生信科研助理招聘
+1/79
-
国家工程物理交叉科学研究中心招收凝聚态物理及相关专业硕士研究生一名
+1/42
-
浙江省人民医院博士后岗位招聘
+1/37
-
济南大学水利与环境学院赵艳侠教授简介
+1/32
-
双一流大学湘潭大学“化工过程模拟与强化”国家地方联合工程研究中心招收博士生
+1/17
-
三峡大学 计算力学课题组招收调剂
+1/7
-
【博士招生】广东工业大学国家优青课题组招收2026年环境方向博士生
+1/7
-
南开大学环境科学与工程学院王鑫教授课题组招收申请考核制博士生
+1/7
-
武汉纺织大学国家杰青课题组诚招调剂硕士研究生
+1/5
-
天津工业大学双一流高校招博士、硕士、博士后
+1/3
-
5科大招收材料专业硕士
+1/3
-
金属材料先进连接技术
+1/2
-
一志愿西南交大机械专硕343求调剂
+1/1
-
香港大学 化学系 博后招聘
+1/1
-
上海交通大学环境智能感知实验室招聘博士后
+1/1
-
【博士招生】上海交通大学机动学院-招2026年秋“申请-考核制”博士生1名-3D打印方向
+1/1
