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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 关于HPLC色谱图问题，急求
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米洋vs西洋

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 娜妹子 at 2013-07-23 12:10:26
样品一定要过滤一下，再进样，梯度可以采用梯度洗脱法试试，先采用线性梯度试试

过滤是肯定要的 试过了 基线都跑不好  现在又出现难题了 要把前面的峰全部分开  有什么好办法没
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21楼2013-07-23 12:18:43
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gwmgyp

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
米洋vs西洋: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-07-23 14:32:06
建议设置梯度洗脱方法，将前两个成分在原来的流动相比例基础上稍微减小一下有机相的比例，待前两个峰洗脱出来后，将有机相的比例增加，走一段等度就可以了，同时将柱温提高至35度，试试吧！！！
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gwmgyp
22楼2013-07-23 14:21:33
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米洋vs西洋

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by gwmgyp at 2013-07-23 14:21:33
建议设置梯度洗脱方法，将前两个成分在原来的流动相比例基础上稍微减小一下有机相的比例，待前两个峰洗脱出来后，将有机相的比例增加，走一段等度就可以了，同时将柱温提高至35度，试试吧！！！

谢谢 我试试 前面一大堆峰都要分开不知道可不可能 今天一直在跑梯度 效果也不怎么好
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23楼2013-07-23 14:33:09
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gwmgyp

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【答案】应助回帖

优化梯度一定要有耐心，不保秘的话，把你的流动相梯度条件发给我看一下，试着帮你优化一下，也许会好一些
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gwmgyp
24楼2013-07-23 16:55:50
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米洋vs西洋

铜虫 (正式写手)
改变梯度后变成了这样的 我想把前面几个峰分开 有什么方法吗 用的是氨基柱
关于HPLC色谱图问题，急求
tup.jpg
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25楼2013-07-24 16:05:54
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zky_panmeng

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
米洋vs西洋: 金币+5, ★有帮助 2013-07-26 13:27:17
1.你的色谱柱子是否是好的
2.你的水相加一点酸，如果是DAD检测，配成。0.2%～0.5%的磷酸，如果是ELSD检测，就配成0.2%-0.5%的醋酸，反正我们实验室一般要加酸的，可以很好抑制拖尾和峰形不好的情况
3.如果你的峰里面是包罗一个杂峰，那么肯定要把有机相比例调低一点，把它拖出来
4.这个可以做定量分析的，用外标法
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26楼2013-07-26 12:44:24
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米洋vs西洋

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by zky_panmeng at 2013-07-26 12:44:24
1.你的色谱柱子是否是好的
2.你的水相加一点酸，如果是DAD检测，配成。0.2%～0.5%的磷酸，如果是ELSD检测，就配成0.2%-0.5%的醋酸，反正我们实验室一般要加酸的，可以很好抑制拖尾和峰形不好的情况
3.如果你的峰里 ...

氨基柱没问题吧 还有我上面的色谱图 前面的峰怎么才能分开啊
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27楼2013-07-26 13:27:58
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zky_panmeng

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by 米洋vs西洋 at 2013-07-26 13:27:58
氨基柱没问题吧 还有我上面的色谱图 前面的峰怎么才能分开啊...

氨基柱一般用于分离含有N的化合物啊，如果你只是分离一般的药材或者原料，就一般的C18柱。而且氨基柱使用是正相环境，就是说有机相比例越高，出峰反而越慢。而一般的C18柱是反向柱，就是说有机相比例越高，出峰越快。你要是氨基柱也可以测，对于你前面的那一堆峰，就要提高有机相比例，你不一定是等度，可以走梯度，比如60分钟内你的乙腈相从90%降到30%。记得最后氨基柱要用高比例的有机相保存，不然氨基柱容易整坏
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28楼2013-07-26 14:57:38
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米洋vs西洋

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
28楼: Originally posted by zky_panmeng at 2013-07-26 14:57:38
氨基柱一般用于分离含有N的化合物啊，如果你只是分离一般的药材或者原料，就一般的C18柱。而且氨基柱使用是正相环境，就是说有机相比例越高，出峰反而越慢。而一般的C18柱是反向柱，就是说有机相比例越高，出峰越快 ...

我走的就是梯度 前面的是一堆糖  氨基柱水相能到那么大的比例么 都试过了 还是分不开
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29楼2013-07-26 15:13:35
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zky_panmeng

木虫 (正式写手)
引用回帖:
29楼: Originally posted by 米洋vs西洋 at 2013-07-26 15:13:35
我走的就是梯度 前面的是一堆糖  氨基柱水相能到那么大的比例么 都试过了 还是分不开...

恩 前面是糖就是不好分开。如果你非要分，你试试AQ柱，可以走100%的水。还有一个办法，就是你的流动相把流速调低
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30楼2013-07-26 15:34:57
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