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小瞎子

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hyc_charles at 2013-07-22 18:31:35
你们实验室没有成像系统吗，建议你用成像系统拍照后，标注好marker和辅助线，我们才好帮你分析。因为看不清楚，只能看到最下端有些条带，看位置，估计是引物二聚体，貌似没什么条带

谢谢。嗯，最近我们那个仪器坏了，新的还没有买回来，所以只能用简易的自己照下来了。
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rover
11楼2013-07-22 19:12:16
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 小瞎子 at 2013-07-22 15:35:51
谢谢，那俩个是师姐毕业前提的，应该是吧。师姐说pcr后的目的条带大概是400bp，我应该也是。退火温度我们是55度。
94    5min
94    30s
55    30s
72   1min
72    10min
循环35次
4      无限
一般情 ...

大家好像都喜欢预变形 5min，个人觉得实在没必要，浪费时间而且损酶活（除非你的taq是热启动），一般用gDNA为模板 2min，质粒 1min，cDNA 40s足以！

用trizol的时候，不管是组织还是细胞，我从来不用显微镜检验，因为trizol已经很厉害了，而且如果你提取的样品是组织或者菌丝什么的，都是经过液氮研磨后再用trizol处理。跑胶的话1.5是没有问题的，只要能看到3条带，即使2条带的mRNA都可以用来反转录！good luck
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互助互励，共奋共进！！
12楼2013-07-23 00:35:35
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-23 00:35:35
大家好像都喜欢预变形 5min，个人觉得实在没必要，浪费时间而且损酶活（除非你的taq是热启动），一般用gDNA为模板 2min，质粒 1min，cDNA 40s足以！

用trizol的时候，不管是组织还是细胞，我从来不用显微镜检验 ...

嗯，谢谢你的指点，今天准备再做一下，看看结果如何，
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rover
13楼2013-07-23 08:34:21
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
内容已删除
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rover
14楼2013-07-24 15:15:54
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
非常感谢各位，我把这次提rna后，反转录，pcr后的电泳图给大家看看，貌似是提出来了。
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rover
15楼2013-07-24 15:20:46
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
这个是图：
PCR
第三次细胞1.jpg
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rover
16楼2013-07-24 15:22:31
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
不知道怎么传出来看不到图片，再试试
PCR-1
第三次细胞.jpg


PCR-2
第三次细胞1.jpg


PCR-3
第三次细胞2.jpg
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rover
17楼2013-07-24 15:24:21
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
谢谢，不好意思
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    • 2013-07-24 15:26:38, 45.99 K
rover
18楼2013-07-24 15:26:54
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
这次怎么没人回答我啊
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rover
19楼2013-07-26 09:03:51
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huayueyang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不要再用致癌物DEPC了，早该用其无毒替代品，外源RNA酶清除剂。
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坚持！
20楼2013-08-04 00:06:18
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