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小瞎子

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR

亲们，最近在细胞中提取RNA,然后反转录，PCR，跑胶，遇到很多问题，想和各位大侠交流一下，不胜感激。
1.配置好的depc水泡过枪头后是不是就不能用了，是一次性的吗？
2.直接用trizol加入到培养瓶中，感觉吹打半天，放置5分钟后显微镜下看细胞还是很多贴壁，是不是还要继续吹打啊，到底要什么细胞形态才是裂解好啊？
3.pcr用的act作上引和下引，目的条带应该是哪个啊，我不太清楚？
4.下面是我做的一些pcr电泳图，请大家帮我看看，是不是没结果啊？
谢谢，谢谢啊
PCR
55℃PCR.jpg


PCR-1
45℃PCR.jpg


PCR-2
IMG_20130712_205646.jpg


PCR-3
IMG_20130712_205711.jpg

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-22 at 16:37 ]
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rover
1楼 2013-07-19 10:01:42
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-22 10:51:20
1.配置好的depc水泡过枪头后是不是就不能用了，是一次性的吗？
DEPC水可以重复使用哈！
2.直接用trizol加入到培养瓶中，感觉吹打半天，放置5分钟后显微镜下看细胞还是很多贴壁，是不是还要继续吹打啊，到底要什么 ...

谢谢，那俩个是师姐毕业前提的，应该是吧。师姐说pcr后的目的条带大概是400bp，我应该也是。退火温度我们是55度。
94    5min
94    30s
55    30s
72   1min
72    10min
循环35次
4      无限
一般情况想你可以看到管子里没有明显组织，现在先是从细胞中提rna，放置15分钟后在显微镜看是啥样的呢
另外跑电泳我用的1.5％的胶可以吧
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rover
9楼2013-07-22 15:35:51
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小瞎子(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-19 12:01:19
就图一中间的两个像是PCR条带，其他都没有
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-07-19 10:48:18
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小瞎子

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-07-19 10:48:18
就图一中间的两个像是PCR条带，其他都没有

谢谢啊，那俩个参照啦，其他的能帮忙分析下不
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rover
3楼2013-07-19 10:56:16
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小瞎子 at 2013-07-19 10:56:16
谢谢啊，那俩个参照啦，其他的能帮忙分析下不...

额。。。其他的你就当什么都没有吧，没什么值得分析的，下边那点亮多为引物二聚体或者非特异啥的
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
4楼2013-07-19 16:22:48
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