| 查看: 1932 | 回复: 3 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
Tina_qiao金虫 (小有名气)
|
[求助]
抗原固定在NC膜上
|
||||
| 本人现在在做免疫层析方面的实验，感觉抗原固定到NC膜上的时候有问题，求可能的原因和解决的办法~~~拜谢啦 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 电镜观察中空膜上细胞的贴壁情况
已经有4人回复
- 【求助/交流】立春红 WB 染色
已经有11人回复
- 【求助/交流】斑点印迹（dot blotting）
已经有6人回复
- 【求助】化验乙肝两对半的原理
已经有7人回复
- 【分享】DNA重组实验中的部分技术
已经有159人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★
137167741: 金币+3, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-10 19:02:56
137167741: 金币+3, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-10 19:02:56
|
楼主说的如果是转移蛋白质到膜上的效率低，那么可以有如下解决方法（湿转）：1.转移缓冲溶液中加入终浓度为20%的甲醇溶液，甲醇可以降低蛋白质洗脱效率，但是增加蛋白质与NC膜的结合能力；甲醇可以防止凝胶变形；甲醇对于高分子蛋白质可延长转移时间。2.转移缓冲溶液中加入终浓度为0.1%的SDS。转膜实际上就是让蛋白质进入硝纤膜的纤维分子之间的空隙，所以蛋白质变成线状比较容易渗入到硝纤膜的纤维分子之间，因为空间位阻小，且不容易在掉下来，所以在转膜缓冲液中加入终浓度的SDS（可配置为：终浓度为0.1%这个浓度不可让蛋白质完全变为线状，不然会影响后面的免疫识别）使得蛋白质的空间构象变为线形比较容易操作成功。热变性的蛋白质的空间构象不是完全线形的，其中还存在很多的二级结构，尽管并非天然二级结构，但是仍然对于蛋白质进入硝纤膜的纤维分子之间的空隙会构成位阻效应，在大分子量的蛋白质中的热变性的非天然二级结构更多，所以位阻效应在转膜时更加明显。至于免疫反应那一步，抗体识别抗原的免疫决定簇有空间免疫决定簇也有序列免疫决定簇，一般只要不是蛋白质完全变为线形且无序列免疫决定簇，就不会没有免疫识别的现象出现。 3.使用小孔径的NC膜，孔径0.2um的膜。4.使用戊二醛交联蛋白质。上样后可以用戊二醛交联膜上的蛋白质，这样蛋白质自身构成的网络与NC膜的纤维网络会彼此交叉构成约束，使得NC膜上的蛋白质不易被洗下来。5.对于大分子量的蛋白质，转膜时电压要高一点，一般 恒压100V，限流400mA，时间也要延长一点，比3小时要长，开始最好也用两块膜，注意加强降温措施，在槽的一边放一块冰来降温。6.适当增加转膜时间。 对于大分子量的蛋白质，转膜时电压要高一点，一般 恒压100V，限流400mA，时间也要延长一点，比3小时要长，注意加强降温措施，在槽的一边放一块冰来降温。 |
4楼2013-09-10 08:54:52
yilunanxia
金虫 (正式写手)
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 816.9
- 散金: 269
- 红花: 2
- 帖子: 334
- 在线: 352.3小时
- 虫号: 1797048
- 注册: 2012-05-05
- 专业: 环境微生物学
2楼2013-07-21 09:06:19
3楼2013-09-09 11:26:29
