24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 929  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dongyan08

木虫 (正式写手)

[求助] pPICZαC质粒抽提浓度低

请问pPICZαC质粒是低拷贝还是高拷贝质粒?我抽了三次质粒浓度都比较低,在0.5-1.0ug/ml,用质粒转了下转化,挑了克隆,重新抽提还是比较低,抽其他的都抽得挺好的,3ug/ml以上,所以想问下什么原因抽的浓度那么低呢?会不会是它拷贝低,我摇菌时间8个小时,导致抽不高浓度呢?麻烦有关经验的指导指导,谢谢!

[ Last edited by dongyan08 on 2013-7-16 at 21:26 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongyan08

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-17 03:55:00
这个质粒应该是高拷贝的吧。我奇怪的是LZ的质粒浓度,一般mini-prep提质粒的浓度不是几百μg/ml的吗?如果大提,浓度可以到几μg/μl。

是啊,我也奇怪,半年前提还是很正常的,现在提浓度就总是那么低!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-07-17 07:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dongyan08(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-19 00:34:11
8个小时可能有点短,12h去试试,如果浓度低很可能是低拷贝的,一般来做可以用PCR来扩增,反正你要得到的是质粒。。
2楼2013-07-16 22:06:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dongyan08(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-19 00:34:27
这个质粒应该是高拷贝的吧。我奇怪的是LZ的质粒浓度,一般mini-prep提质粒的浓度不是几百μg/ml的吗?如果大提,浓度可以到几μg/μl。
3楼2013-07-17 03:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyihui2001

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dongyan08(gyesang代发): 金币+2, 鼓励应助! 2013-07-19 00:34:35
建议你测个序,也许基因突变了!因为大肠杆菌中的质粒片段有时候会被附近的Amp等的启动子启动,少量表达,这样如果该片段对大肠杆菌有毒,就可能导致质粒拷贝数低!也就是说,你之前没有拷贝数第的原因,之后又有,那么从这方面的思路看来,可能是多次传代导致突变了。一般扩增质粒用JM109,或TOP10,质粒保守性强些。
5楼2013-07-17 08:02:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见