【答案】应助回帖

11楼2013-07-17 13:56:19

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

专家经验: +218
MolEPI: 44
应助: 397 (硕士)
贵宾: 0.044
金币: 2118.9
散金: 10
红花: 208
帖子: 5633
在线: 571.6小时
虫号: 1766465
注册: 2012-04-19
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学综合

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-23 09:46:46

引用回帖:

10楼: Originally posted by lifuzhu3838 at 2013-07-17 13:55:19
二楼回复了很多，很厉害的样子。但是我觉得实际一点的做法是买个抗体，做下WB。验证是不是表达了你的那个蛋白先，再去想想为什么不和镍柱亲和等等

用WB和NB检测表达都是可以的，不过表达了也未必收到产品，我的二楼贴因为是把之前与别人讨论的内容贴过来的，之前该提问人已经做了WB和NB检测表达，所以我这里就没有提，这也是我的疏忽，因为楼主没有说他是否做了WB和NB检测表达。

赞一下(1人)

12楼2013-07-18 11:25:44

grape_vine

金虫 (小有名气)

应助: 52 (初中生)
金币: 1139
红花: 6
帖子: 259
在线: 95.2小时
虫号: 2444701
注册: 2013-05-02
专业: 果树学

我弱弱的问一下,哪里有多出来的条带阿?

13楼2013-07-18 12:25:34

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

应助: 30 (小学生)
金币: 2052.2
散金: 15
红花: 4
帖子: 352
在线: 95小时
虫号: 2147898
注册: 2012-11-26
性别: GG
专业: 蛋白质组学

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 00:51:07

我也有次疑问？你的wild 和转化子有明显的差别吗？你所谓的目的条带在野生型中那个是明显多出来的？
而且，加入你是使用强启动子来表达外源基因，一般来说，表达成功的话，会比野生型明显多出一条很浓的带！
所以我怀疑你的目的基因表达可能不成功！

14楼2013-07-18 21:49:19

liushuizhf

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.5
帖子: 25
在线: 15.3小时
虫号: 2330057
注册: 2013-03-08
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

13楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-18 12:25:34
我弱弱的问一下,哪里有多出来的条带阿?

我的目的条带大概35kDa，箭头指的应该是我的目的条带。
其实我也不太确定，所以就想着有什么方法能够确认一下这是不是我的目的条带。

图片1.png

15楼2013-07-21 22:12:23

liushuizhf

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.5
帖子: 25
在线: 15.3小时
虫号: 2330057
注册: 2013-03-08
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

11楼: Originally posted by xl0071334 at 2013-07-17 13:56:19
你可以将你认为的目的条带割下来打个质谱，鉴定一下。

谢谢，这个我去尝试一下

16楼2013-07-21 23:37:59

liushuizhf

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.5
帖子: 25
在线: 15.3小时
虫号: 2330057
注册: 2013-03-08
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

14楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2013-07-18 21:49:19
我也有次疑问？你的wild 和转化子有明显的差别吗？你所谓的目的条带在野生型中那个是明显多出来的？
而且，加入你是使用强启动子来表达外源基因，一般来说，表达成功的话，会比野生型明显多出一条很浓的带！
所以 ...

您好，您提的这个问题特别好，因为之前没有做过此类实验，所以也不太确定应该是什么样的，重新跑的蛋白电泳疑是目的条带挺亮的，但是野生型也有一条比较浅的条带，所以想请您看一下这是不是您说的”比野生型明显多出一条很浓的带！”这样可以确定吗？

图片2.png

17楼2013-07-22 00:43:24

liushuizhf

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.5
帖子: 25
在线: 15.3小时
虫号: 2330057
注册: 2013-03-08
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

9楼: Originally posted by zhangyi05 at 2013-07-17 09:24:20
楼主只有镍柱吗？离子层析柱有没有？试试离子层析柱？

恩，没有，只有镍柱

18楼2013-07-23 08:53:08

liushuizhf

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.5
帖子: 25
在线: 15.3小时
虫号: 2330057
注册: 2013-03-08
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

12楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-18 11:25:44
用WB和NB检测表达都是可以的，不过表达了也未必收到产品，我的二楼贴因为是把之前与别人讨论的内容贴过来的，之前该提问人已经做了WB和NB检测表达，所以我这里就没有提，这也是我的疏忽，因为楼主没有说他是否做了 ...

实验室没有做WB和NB 的条件，之前也让同学帮忙做过一次WB，没有检测出来.

19楼2013-07-23 09:36:03