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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以将你认为的目的条带割下来打个质谱，鉴定一下。

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2013-07-17 13:56:19
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-23 09:46:46
引用回帖:
10楼: Originally posted by lifuzhu3838 at 2013-07-17 13:55:19
二楼回复了很多，很厉害的样子。但是我觉得实际一点的做法是买个抗体，做下WB。验证是不是表达了你的那个蛋白先，再去想想为什么不和镍柱亲和等等

用WB和NB检测表达都是可以的，不过表达了也未必收到产品，我的二楼贴因为是把之前与别人讨论的内容贴过来的，之前该提问人已经做了WB和NB检测表达，所以我这里就没有提，这也是我的疏忽，因为楼主没有说他是否做了WB和NB检测表达。
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12楼2013-07-18 11:25:44
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grape_vine

金虫 (小有名气)
我弱弱的问一下,哪里有多出来的条带阿?
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13楼2013-07-18 12:25:34
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 00:51:07
我也有次疑问？你的wild 和转化子有明显的差别吗？你所谓的目的条带在野生型中那个是明显多出来的？
而且，加入你是使用强启动子来表达外源基因，一般来说，表达成功的话，会比野生型明显多出一条很浓的带！
所以我怀疑你的目的基因表达可能不成功！
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14楼2013-07-18 21:49:19
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liushuizhf

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-18 12:25:34
我弱弱的问一下,哪里有多出来的条带阿?

我的目的条带大概35kDa，箭头指的应该是我的目的条带。
其实我也不太确定，所以就想着有什么方法能够确认一下这是不是我的目的条带。
蛋白表达及纯化
图片1.png
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15楼2013-07-21 22:12:23
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liushuizhf

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xl0071334 at 2013-07-17 13:56:19
你可以将你认为的目的条带割下来打个质谱，鉴定一下。

谢谢，这个我去尝试一下
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16楼2013-07-21 23:37:59
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liushuizhf

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2013-07-18 21:49:19
我也有次疑问？你的wild 和转化子有明显的差别吗？你所谓的目的条带在野生型中那个是明显多出来的？
而且，加入你是使用强启动子来表达外源基因，一般来说，表达成功的话，会比野生型明显多出一条很浓的带！
所以 ...

您好，您提的这个问题特别好，因为之前没有做过此类实验，所以也不太确定应该是什么样的，重新跑的蛋白电泳疑是目的条带挺亮的，但是野生型也有一条比较浅的条带，所以想请您看一下这是不是您说的”比野生型明显多出一条很浓的带！”这样可以确定吗？
蛋白表达及纯化-1
图片2.png
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17楼2013-07-22 00:43:24
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liushuizhf

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhangyi05 at 2013-07-17 09:24:20
楼主只有镍柱吗？离子层析柱有没有？试试离子层析柱？

恩，没有，只有镍柱
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18楼2013-07-23 08:53:08
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liushuizhf

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-18 11:25:44
用WB和NB检测表达都是可以的，不过表达了也未必收到产品，我的二楼贴因为是把之前与别人讨论的内容贴过来的，之前该提问人已经做了WB和NB检测表达，所以我这里就没有提，这也是我的疏忽，因为楼主没有说他是否做了 ...

实验室没有做WB和NB 的条件，之前也让同学帮忙做过一次WB，没有检测出来.
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19楼2013-07-23 09:36:03
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lifuzhu3838

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-18 11:25:44
用WB和NB检测表达都是可以的，不过表达了也未必收到产品，我的二楼贴因为是把之前与别人讨论的内容贴过来的，之前该提问人已经做了WB和NB检测表达，所以我这里就没有提，这也是我的疏忽，因为楼主没有说他是否做了 ...

我也是菜鸟，不要介意
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活到老学到老
20楼2013-07-23 15:57:30
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