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zhang1zheng2

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by doubleping at 2013-07-16 23:35:00
什么是负对照,怎么知道是不是非特异性?我今天又做了稀释20和30倍都扩增24个样,结果稀释20倍扩增出12个,都很亮,30倍扩增出13个,只有几个很亮,其他都非常暗,这样正常吗,接下来我是继续优化稀释倍数,找出最 ...

负对照就是不含基因组的样品
看看是不是基因组之外的东西,造成了污染,这个要自己设计实验了。
找出稀释倍数只是权宜之计,暂时可以用于16s测序
最核心的还是要找到样本本身的问题。
手握日月摘星辰,看透生死破凡尘
11楼2013-07-17 07:56:09
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zhang1zheng2 at 2013-07-17 07:56:09
负对照就是不含基因组的样品
看看是不是基因组之外的东西,造成了污染,这个要自己设计实验了。
找出稀释倍数只是权宜之计,暂时可以用于16s测序
最核心的还是要找到样本本身的问题。...

我稀释一百倍后做16s都扩出来了,条带很亮,且亮度基本接近,这样算扩增成功了吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2013-07-17 23:29:31
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zhang1zheng2

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感觉上是成功了
之所以说是感觉上,是因为没有设计负对照(不含土壤DNA的模板即可)
不确定条带是否是你要的。
不过根据经验判断,实验室成功的
有条件的话去测序吧,然后去BLAST下是什么~
手握日月摘星辰,看透生死破凡尘
13楼2013-07-18 09:14:15
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