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zhang1zheng2

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by doubleping at 2013-07-16 23:35:00
什么是负对照，怎么知道是不是非特异性？我今天又做了稀释20和30倍都扩增24个样，结果稀释20倍扩增出12个，都很亮，30倍扩增出13个，只有几个很亮，其他都非常暗，这样正常吗，接下来我是继续优化稀释倍数，找出最 ...

负对照就是不含基因组的样品
看看是不是基因组之外的东西，造成了污染，这个要自己设计实验了。
找出稀释倍数只是权宜之计，暂时可以用于16s测序
最核心的还是要找到样本本身的问题。
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手握日月摘星辰，看透生死破凡尘
11楼2013-07-17 07:56:09
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhang1zheng2 at 2013-07-17 07:56:09
负对照就是不含基因组的样品
看看是不是基因组之外的东西，造成了污染，这个要自己设计实验了。
找出稀释倍数只是权宜之计，暂时可以用于16s测序
最核心的还是要找到样本本身的问题。...

我稀释一百倍后做16s都扩出来了，条带很亮，且亮度基本接近，这样算扩增成功了吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2013-07-17 23:29:31
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zhang1zheng2

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感觉上是成功了
之所以说是感觉上，是因为没有设计负对照（不含土壤DNA的模板即可）
不确定条带是否是你要的。
不过根据经验判断，实验室成功的
有条件的话去测序吧，然后去BLAST下是什么～
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手握日月摘星辰，看透生死破凡尘
13楼2013-07-18 09:14:15
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