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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] pcr实验

我做土壤DNA的16S区间扩增,将提取的DNA稀释10倍做12个样只有三个有条带,稀释20倍做4个样都有条带,但是有两个样条带非常淡,这是怎么回事?我给怎么办?
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zhang1zheng2 at 2013-07-17 07:56:09
负对照就是不含基因组的样品
看看是不是基因组之外的东西,造成了污染,这个要自己设计实验了。
找出稀释倍数只是权宜之计,暂时可以用于16s测序
最核心的还是要找到样本本身的问题。...

我稀释一百倍后做16s都扩出来了,条带很亮,且亮度基本接近,这样算扩增成功了吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2013-07-17 23:29:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板浓度太高也有可能P不出来的,你需要优化模板的稀释倍数。
2楼2013-07-16 01:21:33
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枫叶丹

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以先测一下DNA浓度,再稀释到10至20纳克每微升,土壤里面有很多杂质,你再看一下260/280,260/230,DNA质量好的话就应该行,若不好,你可以先纯化一下再P
3楼2013-07-16 08:45:11
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 01:21:33
模板浓度太高也有可能P不出来的,你需要优化模板的稀释倍数。

我当时提dna的时候琼脂糖检测不是很亮,应该不是模板浓度太高吧?提的dna是很深的黄色,是杂质太多了吧,这样怎么办呢?是纯化比较好吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-07-16 10:02:37
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