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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] pcr实验

我做土壤DNA的16S区间扩增,将提取的DNA稀释10倍做12个样只有三个有条带,稀释20倍做4个样都有条带,但是有两个样条带非常淡,这是怎么回事?我给怎么办?
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木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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有时候模板稀释后能扩增更好往往是模板含有比较多抑制PCR的杂质。建议多提取一些,然后纯化好一点,比如用酚氯仿去蛋白,CTAB去蛋白去糖,用核酸沉淀剂沉淀,提高纯度和浓度,再做模板稀释梯度的PCR。
为什么
6楼2013-07-16 10:21:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板浓度太高也有可能P不出来的,你需要优化模板的稀释倍数。
2楼2013-07-16 01:21:33
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枫叶丹

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以先测一下DNA浓度,再稀释到10至20纳克每微升,土壤里面有很多杂质,你再看一下260/280,260/230,DNA质量好的话就应该行,若不好,你可以先纯化一下再P
3楼2013-07-16 08:45:11
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 01:21:33
模板浓度太高也有可能P不出来的,你需要优化模板的稀释倍数。

我当时提dna的时候琼脂糖检测不是很亮,应该不是模板浓度太高吧?提的dna是很深的黄色,是杂质太多了吧,这样怎么办呢?是纯化比较好吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-07-16 10:02:37
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