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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 在做霉菌PCR时，遇到很多问题，求助！！！！
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简佳爱学

新虫 (小有名气)

[求助] 在做霉菌PCR时，遇到很多问题，求助！！！！ 已有1人参与

我最近在做霉菌的分子鉴定，提取DNA用的是真菌DNA提取试剂盒，第一次提取的时候，提取DNA后，电泳检测了浓度，几乎看不到条带，但是PCR的结果还不错。后来，再提取DNA的时候，都没有进行浓度检测，直接PCR扩增，但是，越做效果越不好，80%都扩增不出来。
    今天早上，我把之前提取的DNA进行了电泳检测，条带很暗，或者看不到，但是在这些当中，有的菌虽然DNA浓度低，但是PCR结果还挺好的，所以，我现在不知道问题出在哪里。有没有谁做过或者遇到过这样的问题呢，请多给建议呀！！

PS：我在提取DNA的时候，没有进行研磨，直接刮下孢子粉末，加裂解液，然后就按照试剂盒说明书提取了
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1楼 2013-07-12 10:44:16
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刘巧红

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lmhzy1987 at 2013-07-12 11:04:17
楼上说的挺对的，孢子的一般不大好提，而且建议是新鲜的菌丝体

我最近一直在做真菌pcr鉴定，发现有些菌无法区分菌丝跟孢子，做pcr鉴定也扩不出来。请问有什么好办法吗？
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12楼2014-06-09 16:39:23
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zxbz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助交流！ 2013-07-12 11:31:00
建议提取菌丝的DNA，提取孢子的好提吗？没有尝试过
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2楼2013-07-12 10:49:25
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lmhzy1987

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-07-12 11:31:08
楼上说的挺对的，孢子的一般不大好提，而且建议是新鲜的菌丝体
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头疼的文库
3楼2013-07-12 11:04:17
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lipeijun2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们用的是天根的植物提取试剂盒，PDA液体培养基培养3天，液氮研磨，效果还可以，DNA浓度达到50ug/mL
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4楼2013-07-12 11:54:03
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