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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR问题
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guomimi

新虫 (小有名气)

[求助] PCR问题

模板取1.5ul,822bp.实验中PCR温度是58-63摄氏度，但是电泳后结果不仅有杂带而且带都大于1000bp了，这是怎么回事呢？应该怎么得到想要的带呢？
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1楼 2013-07-11 14:46:48
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hyc_charles

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也遇到了同样的问题，根本不是什么退火温度，mg1+浓度什么的问题，这些都换过了，电泳结果还是弥散的大片段，不知道你最后是怎么解决了
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不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
9楼2013-07-15 20:39:00
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流，分子生物期待你更多精彩 2013-07-11 19:49:11
模板少加点。减少延伸时间。从56到72度做退火梯度
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2楼2013-07-11 19:28:03
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小乖_1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-11 19:48:57
我看这不是模板和退火温度的问题，是你的引物有问题吧，建议重新设计引物
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走自己的路，让别人羡慕嫉妒恨去吧！！！
3楼2013-07-11 19:47:12
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
guomimi(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-19 00:39:24
有可能会模板的特异性不高，也可能是引物的问题。。建议做对照改进
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4楼2013-07-11 20:18:50
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