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浩子jerry金虫 (正式写手)
(ˇˍˇ） 想～
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[求助]
跑western，我的片子压不出来，是空白的，为啥？
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各位大神啊，SOS啊，小弟刚学跑蛋白，按正常的步骤一步一步来，丽春红染色有条带，还是两边都加了marker，用抗体孵育后，加ECL，但是后面压片子时，没有条带，一点也没有，请问下有哪些原因呢？有两个膜，一抗是Akt，另一个是Gsk-3，二抗是兔抗，结果片子没条带，额，不知咋了？？ 之后洗净，用GAPDH孵育，压片子也没有，不知哪一步弄错了，哎！ 求助啊，谢谢啊！  |
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浩子jerry
金虫 (正式写手)
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5楼2013-07-10 15:33:34
cicelyzh
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-10 08:15:00
1949stone: 金币+1, 好久不做wb 学习下 2013-07-10 08:40:32
浩子jerry: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-07-12 23:42:41
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浩子jerry: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-07-12 23:42:41
| 如果转膜没有问题，可能出现在抗体上。确定一下二抗与一抗是否匹配，抗体稀释倍数是否合适。二抗偶联的是过氧化物酶吗？ECL荧光在酶作用下的稳定时间不是特别长，浸泡后尽快压片。此外，实验室是否有其他人做western，可以请教一下操作和经验。 |
2楼2013-07-10 01:03:41
浩子jerry
金虫 (正式写手)
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3楼2013-07-10 08:44:19
xiwenhui
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4楼2013-07-10 13:01:48