应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 电击转化
121/2返回列表12下一页
查看: 2128  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

499649610

金虫 (小有名气)

[求助] 电击转化 已有1人参与

各位大虾：电击转化感受态细胞制备应该 注意哪些事项啊！我的菌株是菊欧文氏杆菌，尝试用普通方法（10%甘油洗三次，分装）做感受态，电击后什么菌都不长，质粒没问题，求指导!我的电击条件从1100v--2500v都有试过，电击杯为0.2cm的！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-07-09 10:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细菌、酵母、霉菌都有做感受态的方法，我真不知道用10%甘油洗三次就能做出感受态？我想步骤不会有这么简单吧，因此，你首先需要将感受态细胞做好。
第二，我感觉你电击所用的电压高了，我做酵母转化时，最高的电压用1500V就足够高了（电击杯型号一样），所以，建议你采用较低电压，1000V足够了。

希望对你有所帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
转向地质微生物学
2楼2013-07-10 08:28:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-10 08:28:42
细菌、酵母、霉菌都有做感受态的方法，我真不知道用10%甘油洗三次就能做出感受态？我想步骤不会有这么简单吧，因此，你首先需要将感受态细胞做好。
第二，我感觉你电击所用的电压高了，我做酵母转化时，最高的电压 ...

谢！不过，细菌做电击时用的电压通常都比真菌高 ！真菌往往是先做成原生质体，所以相对更低，这个电压不算高！ 还有一般细菌（大肠杆菌）电击转化 的感受态 就是这样做的！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-07-10 12:39:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-10 12:39:27
谢！不过，细菌做电击时用的电压通常都比真菌高 ！真菌往往是先做成原生质体，所以相对更低，这个电压不算高！ 还有一般细菌（大肠杆菌）电击转化 的感受态 就是这样做的！...

我做酵母电击转化时，用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪，用LiCl溶液做感受态细胞。事实上，用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞，所以，我想可以用这种方法做感受态细胞，然后选择较低的电压进行电击转化。
赞一下 回复此楼
转向地质微生物学
4楼2013-07-11 08:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感受态的做法，我也认为不妥。。。你自己考量。

制粒加到感受态后，要在冰上放置几分钟，其他操作尽量要快。

另外你电转一下其他材料试试，排除一下几个环节
赞一下 回复此楼
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
5楼2013-07-11 08:45:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 如来神掌 at 2013-07-11 08:45:53
感受态的做法，我也认为不妥。。。你自己考量。

制粒加到感受态后，要在冰上放置几分钟，其他操作尽量要快。

另外你电转一下其他材料试试，排除一下几个环节

谢 ！但是我感受态细胞是参照《分子克隆实验指南》上的方法操作的 ，我们实验室有人做芽孢杆菌的 用那种方法都能转进去啊
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-11 09:54:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-11 08:05:08
我做酵母电击转化时，用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪，用LiCl溶液做感受态细胞。事实上，用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞，所以，我想 ...

谢 我试试
回复此楼
7楼2013-07-11 09:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lylu425

新虫 (初入文坛)
请问你是做什么转化的呢？我也在做相关的转化，做原生质体转的。
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-24 15:22:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-11 08:05:08
我做酵母电击转化时，用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪，用LiCl溶液做感受态细胞。事实上，用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞，所以，我想 ...

你这个想法要不得，这是要爆杯的节奏。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-24 21:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科
引用回帖:
9楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-07-24 21:33:02
你这个想法要不得，这是要爆杯的节奏。
...

不知道为什么？能解释下吗？谢谢
赞一下 回复此楼
转向地质微生物学
10楼2014-07-25 17:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 499649610 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 5/250 2026-03-25 00:20 by 元夕元
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +5 @taotao 2026-03-19 5/250 2026-03-24 21:07 by greychen00
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:46 by zhouxuan..
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 274求调剂 +5 顾九笙要谦虚 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:43 by jhhcooi
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 22:01 by fuyu_
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭