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499649610

金虫 (小有名气)

[求助] 电击转化 已有1人参与

各位大虾：电击转化感受态细胞制备应该 注意哪些事项啊！我的菌株是菊欧文氏杆菌，尝试用普通方法（10%甘油洗三次，分装）做感受态，电击后什么菌都不长，质粒没问题，求指导!我的电击条件从1100v--2500v都有试过，电击杯为0.2cm的！
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1楼 2013-07-09 10:12:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细菌、酵母、霉菌都有做感受态的方法，我真不知道用10%甘油洗三次就能做出感受态？我想步骤不会有这么简单吧，因此，你首先需要将感受态细胞做好。
第二，我感觉你电击所用的电压高了，我做酵母转化时，最高的电压用1500V就足够高了（电击杯型号一样），所以，建议你采用较低电压，1000V足够了。

希望对你有所帮助。
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转向地质微生物学
2楼2013-07-10 08:28:42
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499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-10 08:28:42
细菌、酵母、霉菌都有做感受态的方法，我真不知道用10%甘油洗三次就能做出感受态？我想步骤不会有这么简单吧，因此，你首先需要将感受态细胞做好。
第二，我感觉你电击所用的电压高了，我做酵母转化时，最高的电压 ...

谢！不过，细菌做电击时用的电压通常都比真菌高 ！真菌往往是先做成原生质体，所以相对更低，这个电压不算高！ 还有一般细菌（大肠杆菌）电击转化 的感受态 就是这样做的！
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3楼2013-07-10 12:39:27
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普通回帖

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-10 12:39:27
谢！不过，细菌做电击时用的电压通常都比真菌高 ！真菌往往是先做成原生质体，所以相对更低，这个电压不算高！ 还有一般细菌（大肠杆菌）电击转化 的感受态 就是这样做的！...

我做酵母电击转化时，用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪，用LiCl溶液做感受态细胞。事实上，用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞，所以，我想可以用这种方法做感受态细胞，然后选择较低的电压进行电击转化。
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转向地质微生物学
4楼2013-07-11 08:05:08
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感受态的做法，我也认为不妥。。。你自己考量。

制粒加到感受态后，要在冰上放置几分钟，其他操作尽量要快。

另外你电转一下其他材料试试，排除一下几个环节
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生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
5楼2013-07-11 08:45:53
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499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 如来神掌 at 2013-07-11 08:45:53
感受态的做法，我也认为不妥。。。你自己考量。

制粒加到感受态后，要在冰上放置几分钟，其他操作尽量要快。

另外你电转一下其他材料试试，排除一下几个环节

谢 ！但是我感受态细胞是参照《分子克隆实验指南》上的方法操作的 ，我们实验室有人做芽孢杆菌的 用那种方法都能转进去啊
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6楼2013-07-11 09:54:16
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499649610

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-11 08:05:08
我做酵母电击转化时，用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪，用LiCl溶液做感受态细胞。事实上，用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞，所以，我想 ...

谢 我试试
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7楼2013-07-11 09:55:18
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lylu425

新虫 (初入文坛)
请问你是做什么转化的呢？我也在做相关的转化，做原生质体转的。
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8楼2014-07-24 15:22:29
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-11 08:05:08
我做酵母电击转化时，用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪，用LiCl溶液做感受态细胞。事实上，用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞，所以，我想 ...

你这个想法要不得，这是要爆杯的节奏。

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9楼2014-07-24 21:33:02
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科
引用回帖:
9楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-07-24 21:33:02
你这个想法要不得，这是要爆杯的节奏。
...

不知道为什么？能解释下吗？谢谢
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转向地质微生物学
10楼2014-07-25 17:45:48
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