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499649610

金虫 (小有名气)

[求助] 电击转化 已有1人参与

各位大虾:电击转化感受态细胞制备应该 注意哪些事项啊!我的菌株是菊欧文氏杆菌,尝试用普通方法(10%甘油洗三次,分装)做感受态,电击后什么菌都不长,质粒没问题,求指导!我的电击条件从1100v--2500v都有试过,电击杯为0.2cm的!
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细菌、酵母、霉菌都有做感受态的方法,我真不知道用10%甘油洗三次就能做出感受态?我想步骤不会有这么简单吧,因此,你首先需要将感受态细胞做好。
第二,我感觉你电击所用的电压高了,我做酵母转化时,最高的电压用1500V就足够高了(电击杯型号一样),所以,建议你采用较低电压,1000V足够了。

希望对你有所帮助。
转向地质微生物学
2楼2013-07-10 08:28:42
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499649610

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-10 08:28:42
细菌、酵母、霉菌都有做感受态的方法,我真不知道用10%甘油洗三次就能做出感受态?我想步骤不会有这么简单吧,因此,你首先需要将感受态细胞做好。
第二,我感觉你电击所用的电压高了,我做酵母转化时,最高的电压 ...

谢!不过,细菌做电击时用的电压通常都比真菌高 !真菌往往是先做成原生质体,所以相对更低,这个电压不算高! 还有一般细菌(大肠杆菌)电击转化 的感受态 就是这样做的!
3楼2013-07-10 12:39:27
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普通回帖

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 499649610 at 2013-07-10 12:39:27
谢!不过,细菌做电击时用的电压通常都比真菌高 !真菌往往是先做成原生质体,所以相对更低,这个电压不算高! 还有一般细菌(大肠杆菌)电击转化 的感受态 就是这样做的!...

我做酵母电击转化时,用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪,用LiCl溶液做感受态细胞。事实上,用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞,所以,我想可以用这种方法做感受态细胞,然后选择较低的电压进行电击转化。
转向地质微生物学
4楼2013-07-11 08:05:08
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感受态的做法,我也认为不妥。。。你自己考量。

制粒加到感受态后,要在冰上放置几分钟,其他操作尽量要快。

另外你电转一下其他材料试试,排除一下几个环节
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
5楼2013-07-11 08:45:53
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499649610

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 如来神掌 at 2013-07-11 08:45:53
感受态的做法,我也认为不妥。。。你自己考量。

制粒加到感受态后,要在冰上放置几分钟,其他操作尽量要快。

另外你电转一下其他材料试试,排除一下几个环节

谢 !但是我感受态细胞是参照《分子克隆实验指南》上的方法操作的 ,我们实验室有人做芽孢杆菌的 用那种方法都能转进去啊
6楼2013-07-11 09:54:16
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499649610

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-11 08:05:08
我做酵母电击转化时,用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪,用LiCl溶液做感受态细胞。事实上,用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞,所以,我想 ...

谢 我试试
7楼2013-07-11 09:55:18
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lylu425

新虫 (初入文坛)

请问你是做什么转化的呢?我也在做相关的转化,做原生质体转的。
8楼2014-07-24 15:22:29
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by liujianmin68 at 2013-07-11 08:05:08
我做酵母电击转化时,用山梨醇做的感受态细胞。如果没有电转化仪,用LiCl溶液做感受态细胞。事实上,用LiCl溶液做的感受态细胞也可以用来做电击转化。
一般细菌感受态细胞用CaCl2或MgCl2做感受态细胞,所以,我想 ...

你这个想法要不得,这是要爆杯的节奏。

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-07-24 21:33:02
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

引用回帖:
9楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-07-24 21:33:02
你这个想法要不得,这是要爆杯的节奏。
...

不知道为什么?能解释下吗?谢谢
转向地质微生物学
10楼2014-07-25 17:45:48
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