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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 无菌检测
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tanglian8655

金虫 (正式写手)

[求助] 无菌检测

小妹有一实验操作卡壳了，有点小问题想问问各位大侠

取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中。30-35℃培养18-24h，用0.9%无菌氯化钠制成每毫升含菌小于100菌落形成单位（cfu）的菌悬液。
请问这个菌悬液是怎么操作的啊
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1楼 2013-07-08 10:31:40
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snqguang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做梯度稀释，涂板，计数，再确定哪个稀释度合适你的要求即可。
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2楼2013-07-08 11:04:15
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老娘爱吃肉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助交流！ 2013-07-08 14:51:16
亲，你这不叫无菌实验吧，要想配制成小于100cfu/ml的菌悬液，不能把金黄色葡萄球菌接种到营养肉汤液体培养基中，而是应先把金黄色葡萄球菌在营养琼脂板上活化一下啊，32°，24h就行了，然后拿一个6x10~8cfu/ml的麦氏比浊管作对照，用接种环挑取营养琼脂板上的金黄色葡萄球菌到0.9%无菌氯化钠（无菌的体积10ml）中，等到其浓度和比浊管的浓度相当时，可以认为金黄色葡萄球菌的浓度为6x10~8cfu/ml，然后逐级稀释到6x10cfu/ml就是你所需的菌悬液了
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3楼2013-07-08 11:05:59
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tanglian8655

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 老娘爱吃肉 at 2013-07-08 11:05:59
亲，你这不叫无菌实验吧，要想配制成小于100cfu/ml的菌悬液，不能把金黄色葡萄球菌接种到营养肉汤液体培养基中，而是应先把金黄色葡萄球菌在营养琼脂板上活化一下啊，32°，24h就行了，然后拿一个6x10~8cfu/ml的麦氏 ...

药典上面就是在这么写的，请问亲是不是老手啊，请教！
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4楼2013-07-08 11:19:45
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般的如二楼所说的，稀释浓度梯度，涂平板，看哪个浓度合适就好
简单直接
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5楼2013-07-09 08:04:39
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章鱼儿44

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还是做梯度稀释吧  涂平板后选择合适浓度的梯度 具体方法一般的微生物实验教材上就有
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6楼2013-07-09 08:50:05
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henshui005

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为每个实验室的工作菌悬液的初始浓度不太一样 所以还是的自行摸索一套方法 我们实验室一般金葡稀释至10-6，基本能达到10-100cfu
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7楼2013-07-11 08:14:53
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younx

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

自己配一下麦氏比浊计，先确定一个浓度Y，然后稀释菌液与比浊计进行对比，可以测OD值，确定好之后进行10倍稀释，浇板计数，-5，-6，-7，-8浓度的记一下得到的菌落生长数再反推回去就是你配的比浊计的浓度，以后根据这个浓度再稀释到你需要的浓度就可以了
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8楼2013-07-11 13:31:56
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神奇的名字

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

方法1：简单直接的方法就是10倍梯度稀释，即取1ml 已经培养18-24h的培养液于装有9ml的无菌试管中，标记为-1。混合均匀后吸取1ml 稀释液于另一只新的装有9ml的无菌试管中，标记为-2。以此类推，一直稀释到-8。对每个稀释度涂平板（3个平行），培养，计数就能得到你所需要的小于100菌落形成单位（cfu）的平板。
方法2：测OD值，一定的OD值稀释多少倍数后，能得到所需的菌悬液。这样做会对今后的工作带来便捷，如果只单纯的做一次，那么方法1是你的最佳选择。
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9楼2013-07-12 11:56:18
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