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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助——质粒大提跑胶成这样
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怕哦哦哦

捐助贵宾 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你得琼脂糖是哪买的啊，换个好点的吧
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11楼2013-07-08 15:13:55
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的凝胶中EB含量加了吗
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船到桥头自然直
12楼2013-07-08 16:48:46
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quxixing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 20:23:40
你这个我真看不懂，提质粒跑胶出来是弥散哦，我们实验室提的时候，那个菌液我们直接用5ml离心，离心后再用1ml上清液将沉淀混悬均匀转移到i.5ml的EP管中，然后再接着离心沉淀后做哦，  不过，看你跑胶的情况，你可以在洗的那几步时时间延长点。
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13楼2013-07-08 18:22:50
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 冰风颤木 at 2013-07-08 16:48:46
你的凝胶中EB含量加了吗

我们用的是gel red，一般配置25ml的1%胶加入2.5微升，应该够吧。。。

gel red还是买的进口原装的，600大洋。。。。。
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14楼2013-07-08 19:49:51
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看marker说明你的胶有问题，很可能是没有融化完全。根据样品的情况，猜测左边的两个上样量有点大，右边靠近marker的可能是样品中存在杂质蛋白或者多糖导致样品滞留上样孔而不能跑出来。个人见解，仅供参考。
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15楼2013-07-09 08:39:01
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zyllucky

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Bella0224: 金币+1 2013-07-09 15:11:41
感觉没提出来质粒，是不是菌体太多，没有裂解，质粒没从细胞里释放出来。提质粒加溶液II后菌液应该变透明，如果还是浑浊的说明菌体裂解不完全。
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糊涂仙儿
16楼2013-07-09 09:24:13
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740082951

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Bella0224: 金币+1 2013-07-09 15:12:34
很明显上样量太多，我也遇到过。
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一天一点爱恋
17楼2013-07-09 14:23:30
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by zyllucky at 2013-07-09 09:24:13
感觉没提出来质粒，是不是菌体太多，没有裂解，质粒没从细胞里释放出来。提质粒加溶液II后菌液应该变透明，如果还是浑浊的说明菌体裂解不完全。

那如果按照试剂盒的要求，加入了相应的溶液2后，菌液木有变透明，是否可以再多加入一些，直到变透明呢？
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18楼2013-07-09 15:12:28
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 740082951 at 2013-07-09 14:23:30
很明显上样量太多，我也遇到过。

是么？那一般上样量要多少微克呢？
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19楼2013-07-09 15:12:51
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
楼主，可以试一下用0.5X的TAE来配胶，跑胶。
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20楼2013-07-10 15:48:18
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