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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测某种化合物对特定酶的抑制作用
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

[求助] 测某种化合物对特定酶的抑制作用

最近在做酶活抑制实验，在160uM抑制剂浓度下反应10分钟后测吸光值，计算得抑制率为42%，2分钟后我又测了一次吸光值，计算得抑制率变为41%,再2分钟后我又测了一次吸光值，抑制率变为40%，之后每隔2分钟测一次，得到的抑制率依次为：39%，35%，34%。在其他抑制剂浓度下也有同样的趋势出现。我的吸光值都是在2-3.5之间的。
请教各位高手，出现这种情况是什么原因，做酶活抑制试验需要满足什么条件才行。
谢谢谢谢谢谢！！！！！！
如果不方便回答的话，求大师给个链接，我自己看也行，或者给篇文献的标题，我自己找来看看也行！！
谢谢谢谢谢谢！！！！！！
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1楼 2013-07-04 15:04:48
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)
你的原话：
之后每隔2分钟测一次，得到的抑制率依次为：39%，35%，34%。在其他抑制剂浓度下也有同样的趋势出现。
抑制率=（A空白组-A抑制剂组）/A空白组

请你自己从公式分析为什么抑制率会下降？可能是你的产物不稳定 吸光值达到一定时间 就下降了
所以我建议你扫描时间曲线  然后所有的样品都在同样的时刻测定
另外我说的是 吸光值未下降的那一段 你没看清楚
测酶活都是测初速度 就是刚开始上升的那段 请复习生化书
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11楼2013-07-11 20:38:35
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-05 07:52:40
拉风蜗牛王: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-07-05 13:54:37
首先 吸光值在0.1-0.9之间才可靠 仪器读数是有一个可信范围的 超过这个范围的读数无意义 请稀释酶浓度
再者 延长时间 吸光值会下降 说明这个时候反应没到平衡 建议延长反应时间 或者所有的样品都在统一的时间点测定
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2楼2013-07-05 00:19:43
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-05 07:53:01
拉风蜗牛王: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-07-07 18:32:03
控制吸光值读数 可以稀释酶液 增加反应体系的体积 或者缩短反应时间
吸光值之后下降 还有可能是生成物不稳定
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3楼2013-07-05 00:22:31
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
谢谢您的帮助！！！！！我的吸光值并没有下降，是计算得到的抑制率下降了，抑制率=（A空白组-A抑制剂组）/A空白组。空白组是指只加酶和底物但是不加抑制剂。
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4楼2013-07-05 13:38:59
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