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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2013-07-05 10:10:03
好像你的DNA量太少了吧，还有你电击后要立即马上加上山梨醇悬起来，要求非常快的。

DNA量和转化效率成反比的，我帖子中的文献做过比对实验
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春晓赏花，夏日听蝉，箫吹秋月，酒饮冬霜~
11楼2013-07-06 15:38:06
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-05 17:18:27
1.DNA是线性化后吗？线性化后必须PCR纯化，离子对电转的效率影响很大
2.电压电阻我觉得没有问题，因为我们实验室也是一样的。
3.你使用G418抗性，那应该是9K载体吧，可以试试使用MD平板，我们在使用zeocin抗性YPD ...

LDST配好4度放着的，DTT是在使用之前再加。我转化的是DNA片段，是要进行基因重组整合进基因组的，不是载体
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12楼2013-07-06 15:39:43
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
皇马铁卫: 金币+5 2013-07-07 17:07:28
引用回帖:
12楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2013-07-06 15:39:43
LDST配好4度放着的，DTT是在使用之前再加。我转化的是DNA片段，是要进行基因重组整合进基因组的，不是载体...

请问你的片段多大呢？我之前转个一个5000bp的片段进去，都没有遇到这种情况~会不会是片段的问题？是利用重叠延伸PCR得到的片段吗？
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13楼2013-07-06 20:33:22
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-06 20:33:22
请问你的片段多大呢？我之前转个一个5000bp的片段进去，都没有遇到这种情况~会不会是片段的问题？是利用重叠延伸PCR得到的片段吗？...

我的是3K多，是从载体上切下来的。你们做zeocin筛选，一次可以长出来多少克隆
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14楼2013-07-07 17:06:10
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
皇马铁卫: 金币+5 2013-07-09 08:53:08
引用回帖:
14楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2013-07-07 17:06:10
我的是3K多，是从载体上切下来的。你们做zeocin筛选，一次可以长出来多少克隆...

涂布50微升，至少生70个以上.......
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15楼2013-07-07 18:59:23
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-07 18:59:23
涂布50微升，至少生70个以上..........

你们做的是蛋白表达吗？用的什么载体？转化的DNA是线性化的吗？
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16楼2013-07-09 08:54:32
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sdau_yzy

新虫 (初入文坛)
楼主，我想请教一下LDST有什么作用啊？谢谢
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17楼2018-08-08 09:33:41
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香凝冷星

银虫 (小有名气)
我最近遇到类似问题，不知道楼主最终怎么解决的？希望给点建议!
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18楼2021-01-29 10:59:33
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