24小时热门版块排行榜    

查看: 3044  |  回复: 17

皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2013-07-05 10:10:03
好像你的DNA量太少了吧,还有你电击后要立即马上加上山梨醇悬起来,要求非常快的。

DNA量和转化效率成反比的,我帖子中的文献做过比对实验
春晓赏花,夏日听蝉,箫吹秋月,酒饮冬霜~
11楼2013-07-06 15:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-05 17:18:27
1.DNA是线性化后吗?线性化后必须PCR纯化,离子对电转的效率影响很大
2.电压电阻我觉得没有问题,因为我们实验室也是一样的。
3.你使用G418抗性,那应该是9K载体吧,可以试试使用MD平板,我们在使用zeocin抗性YPD ...

LDST配好4度放着的,DTT是在使用之前再加。我转化的是DNA片段,是要进行基因重组整合进基因组的,不是载体
春晓赏花,夏日听蝉,箫吹秋月,酒饮冬霜~
12楼2013-07-06 15:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
皇马铁卫: 金币+5 2013-07-07 17:07:28
引用回帖:
12楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2013-07-06 15:39:43
LDST配好4度放着的,DTT是在使用之前再加。我转化的是DNA片段,是要进行基因重组整合进基因组的,不是载体...

请问你的片段多大呢?我之前转个一个5000bp的片段进去,都没有遇到这种情况~会不会是片段的问题?是利用重叠延伸PCR得到的片段吗?
13楼2013-07-06 20:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-06 20:33:22
请问你的片段多大呢?我之前转个一个5000bp的片段进去,都没有遇到这种情况~会不会是片段的问题?是利用重叠延伸PCR得到的片段吗?...

我的是3K多,是从载体上切下来的。你们做zeocin筛选,一次可以长出来多少克隆
春晓赏花,夏日听蝉,箫吹秋月,酒饮冬霜~
14楼2013-07-07 17:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
皇马铁卫: 金币+5 2013-07-09 08:53:08
引用回帖:
14楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2013-07-07 17:06:10
我的是3K多,是从载体上切下来的。你们做zeocin筛选,一次可以长出来多少克隆...

涂布50微升,至少生70个以上.......
15楼2013-07-07 18:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-07 18:59:23
涂布50微升,至少生70个以上..........

你们做的是蛋白表达吗?用的什么载体?转化的DNA是线性化的吗?
春晓赏花,夏日听蝉,箫吹秋月,酒饮冬霜~
16楼2013-07-09 08:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdau_yzy

新虫 (初入文坛)

楼主,我想请教一下LDST有什么作用啊?谢谢
17楼2018-08-08 09:33:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香凝冷星

银虫 (小有名气)

我最近遇到类似问题,不知道楼主最终怎么解决的?希望给点建议!
18楼2021-01-29 10:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 皇马铁卫 的主题更新
信息提示
请填处理意见