5楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2013-07-05 10:10:03
好像你的DNA量太少了吧，还有你电击后要立即马上加上山梨醇悬起来，要求非常快的。

7楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-05 17:18:27
1.DNA是线性化后吗？线性化后必须PCR纯化，离子对电转的效率影响很大
2.电压电阻我觉得没有问题，因为我们实验室也是一样的。
3.你使用G418抗性，那应该是9K载体吧，可以试试使用MD平板，我们在使用zeocin抗性YPD ...

12楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2013-07-06 15:39:43
LDST配好4度放着的，DTT是在使用之前再加。我转化的是DNA片段，是要进行基因重组整合进基因组的，不是载体...

13楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-06 20:33:22
请问你的片段多大呢？我之前转个一个5000bp的片段进去，都没有遇到这种情况~会不会是片段的问题？是利用重叠延伸PCR得到的片段吗？...

14楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2013-07-07 17:06:10
我的是3K多，是从载体上切下来的。你们做zeocin筛选，一次可以长出来多少克隆...

15楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-07 18:59:23
涂布50微升，至少生70个以上..........