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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5RACE
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后悔无期

金虫 (小有名气)

[求助] 5RACE

5RACE弥散   是否可以说明  逆转录的CDNA没有问题呢?
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
1楼 2013-07-02 09:30:33
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
后悔无期: 金币+5 2013-07-11 16:48:17
非特异性扩增会导致弥散的带,但是不能就此判别cDNA质量.2轮PCR出带才是硬道理！
很多人都想判定cDNA质量，有两个简单的方法，1是找个内参基因来扩增以下，在没有DNA污染的情况下，模板可以在稀释很多倍（倍比稀释）30循环扩增出内参（高表达基因），说明cDNA还不错。2 找一个研究的比较清楚的序列变化小的全长在2K的基因，选个合适的浓度，自己去扩增一下，能扩增出来，说明cDNA全长性良好。
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3楼2013-07-04 08:31:23
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以再用这个PCR产物做1次PCR看看结果如何？好像这样不能完全判断cDNA的情况。
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2楼2013-07-04 07:47:51
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