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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助-提RNA问题
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欠踹的背影

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2013-07-03 09:37:50
RNA电泳的时候上样500ng就够了，胶用1%的，marker用2000的，很容易看出来有没有基因组污染，有的话，应该在2000上面有一个条带，是基因组DNA，你这个上面那个最亮的应该是基因组DNA，下面的两条带位置也不对，你再重 ...

你好，那我还想问问基因组DNA污染一般由什么原因造成的啊？我还是按照原来的方式的提的，怎么会出现这种情况，有点不解
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11楼2013-07-03 09:40:45
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zhouking8758

木虫 (正式写手)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-04 11:40:22
如果有DNA污染，可以加DNA酶来消化去除。
提取RNA过程要防止RNase的污染，去上清的时候宁可损失一点，也不要吸取到蛋白质等。
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12楼2013-07-03 09:56:42
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-06 02:00:42
引用回帖:
11楼: Originally posted by 欠踹的背影 at 2013-07-03 09:40:45
你好，那我还想问问基因组DNA污染一般由什么原因造成的啊？我还是按照原来的方式的提的，怎么会出现这种情况，有点不解...

就是在组织中提取RNA的时候带出来的DNA，这是很常见的，用DNA酶处理，除掉基因组DNA的污染
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如果不努力，肯定没收获！
13楼2013-07-03 14:37:44
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欠踹的背影

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2013-07-03 14:37:44
就是在组织中提取RNA的时候带出来的DNA，这是很常见的，用DNA酶处理，除掉基因组DNA的污染...

谢谢，可是我用的是OMEGA公司的提RNA试剂盒，出现这种问题的可能性不大吧
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14楼2013-07-03 19:46:43
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA残留多，rna降解。。建议抽提时要小心吸取上清
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15楼2013-07-03 20:02:53
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
亮的带是DNA
如果你点了3ul 那么你的RNA量应该是小于100ng/ul的 量比较低了
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16楼2013-07-03 23:21:32
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 欠踹的背影 at 2013-07-03 09:40:45
你好，那我还想问问基因组DNA污染一般由什么原因造成的啊？我还是按照原来的方式的提的，怎么会出现这种情况，有点不解...

我怀疑你是不是这次的原始材料量太大了
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17楼2013-07-03 23:22:27
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-04 13:39:58
引用回帖:
14楼: Originally posted by 欠踹的背影 at 2013-07-03 19:46:43
谢谢，可是我用的是OMEGA公司的提RNA试剂盒，出现这种问题的可能性不大吧...

试剂盒也很可能有DNA污染的，我们同学也有用试剂盒提的，但是他们每次提完就再用DNA酶处理
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如果不努力，肯定没收获！
18楼2013-07-04 08:29:45
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新提吧，都降解了
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19楼2013-07-04 10:32:25
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青荷初想

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 电泳检测RNA，单纯看提取效果时，不用DEPC水配的缓冲液哦！ 2013-07-06 02:02:08
你电泳的缓冲液是用DEPC水配的吗，而且一般要放在4℃冰箱电泳，电泳时间没必要那么长，提取的时候室温要控制，你是边研磨边加液氮吗？组织要求一直是处于冰冻状态，不能融化。
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20楼2013-07-04 14:06:37
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