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maliyuan0924

铁虫 (小有名气)

[交流] 磷酸钙转染的注意事项

磷酸钙转染时，把DNA-氯化钙溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中。这是为什么呢？
说明书上写的
注意事项：  ¾ 转染时，把DNA-氯化钙溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中。  ¾ 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且电泳检测抽提到的质粒90％以上都是超螺旋。  ¾ 在用磷酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的最佳浓度为3%左右。  ¾ BBS溶液的pH值直接关系到转染效率，尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。 ¾ 转染时由于质粒不同、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。 ¾  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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1楼 2013-06-26 18:26:49
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