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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)

[交流] pGL3-Promoter 插入位点 已有2人参与

目的片段可以不插到灰色的区域而是插到HindIII（245）和NcoI （278）之间吗？
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  • 附件 1 : pGL3.doc
    • 2013-06-26 10:52:51, 116 K

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1楼 2013-06-26 10:55:06
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你完全可以把图片发上来，你是什么目的片段呢？

pGL3-Promoter  插入位点
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-06-26 12:26:15
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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-06-26 12:26:15
你完全可以把图片发上来，你是什么目的片段呢？

内含子的片段，但不是启动子
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3楼2013-06-26 13:12:29
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 易翔仪冲 at 2013-06-26 13:12:29
内含子的片段，但不是启动子...

那应该是可以的
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-06-26 14:19:32
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yhbletter

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-27 16:06:21
答案是：基本是不可以的，引物你插入的位点是启动子的后面，如果你插入的片段有ATG起始密码子，那么，你的质粒转入细胞时会从你插入的片段中ATG开始转录并翻译蛋白，如果读框没错的话，相当于你插入的片段和LUC融合蛋白（插入的读框没有终止密码子情况下），如果读框错误，那么转录后翻译的蛋白会导致LUC读框错误，最终导致你翻译的蛋白什么都不是。
不知道你想插入到哪里的目的是？
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5楼2013-06-26 14:52:05
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yhbletter

铜虫 (小有名气)
你的这个质粒基本是用来研究转录调控的
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6楼2013-06-26 14:53:24
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易翔仪冲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yhbletter at 2013-06-26 14:53:24
你的这个质粒基本是用来研究转录调控的

恩，是研究调控的，但是它在原来的基因中也是在两个外显子之间的，所以它是在启动子后面，我是想如果插到启动子前面的话它的作用还跟在原来的位置的作用一样吗？
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7楼2013-06-27 09:14:53
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yhbletter

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 易翔仪冲 at 2013-06-27 09:14:53
恩，是研究调控的，但是它在原来的基因中也是在两个外显子之间的，所以它是在启动子后面，我是想如果插到启动子前面的话它的作用还跟在原来的位置的作用一样吗？...

如果是这样的话，你可以插入到启动在后面，但是注意不要在luc基因起始密码子ATG前面再出现一个ATG
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8楼2013-06-28 16:43:40
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