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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 慢病毒包装问题
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pyq2011

金虫 (小有名气)

[求助] 慢病毒包装问题 已有2人参与

做慢病毒包装，3质粒共转染293t细胞 出现荧光，但收上清再次感染细胞没有荧光出现是什么原因？？
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海阔凭鱼跃，天高任鸟飞
1楼 2013-06-25 23:20:02
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daisyhappy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-27 20:08:23
pyq2011: 金币+3, ★有帮助 2013-06-27 21:30:35
引用回帖:
3楼: Originally posted by pyq2011 at 2013-06-26 18:59:27
谢谢，荧光挺多，荧光看着不弱，第一步转染对质粒要求大吗？...

如果是荧光不弱，那很可能是你后期损失了。检查转染后到收毒环节一一排查，应该不难找到原因。
转染时对质粒的质量要求较高，直接影响你是否能够讲基因转进去包装成完整的病毒颗粒。
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4楼2013-06-26 22:37:27
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daisyhappy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
pyq2011(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-27 08:48:08
你转染时候的荧光强吗？还是比较弱？
可以加大感染量，先确定有没有包装成完整的病毒。如果有的话，有可能是荧光比较弱，导致感染后没有荧光出现。
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2楼2013-06-26 17:40:07
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pyq2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daisyhappy at 2013-06-26 17:40:07
你转染时候的荧光强吗？还是比较弱？
可以加大感染量，先确定有没有包装成完整的病毒。如果有的话，有可能是荧光比较弱，导致感染后没有荧光出现。

谢谢，荧光挺多，荧光看着不弱，第一步转染对质粒要求大吗？
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海阔凭鱼跃，天高任鸟飞
3楼2013-06-26 18:59:27
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by daisyhappy at 2013-06-26 17:40:07
你转染时候的荧光强吗？还是比较弱？
可以加大感染量，先确定有没有包装成完整的病毒。如果有的话，有可能是荧光比较弱，导致感染后没有荧光出现。

你好，我也遇到同样的问题……我是用PLL3.7，VSVG,REV以及PRRE四种质粒共转293T有70%细胞出现荧光，但是收集上清用0.45uM滤膜过滤后按病毒上清：培养基=1:1的比例感染CHO细胞后看不到荧光，不知道什么原因，还有怎样才能确定有没有包装成完整病毒？
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
5楼2013-07-16 09:55:05
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