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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助分子克隆问题——挑不出阳性克隆！
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木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

把PCR产物先进行T-A克隆或平末端克隆到克隆载体，再从克隆载体切下来，就保证末端是酶切好的粘性末端了。载体电泳时间延长点，如果可能，在另外的泳道加单酶切的载体做对照。
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为什么
11楼2013-07-11 07:54:43
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后悔无期

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-10 11:10:51
质粒的构建，要特别注意几个问题。载体和插入片段的mol比。一般是1：10.载体一般0.03pmol，插入片段0.3pmol。。mol数不会算可以再和我交流

请问摩尔数该怎么换算呀！
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
12楼2013-07-11 08:15:04
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lilu317

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

载体要处理干净一点。实在不行你做个去磷酸化处理
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13楼2014-11-22 17:14:43
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lilu317

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 后悔无期 at 2013-07-11 08:15:04
请问摩尔数该怎么换算呀！...

举个例子来说
例如你的外源片段是1kb，载体2kb
外源片段浓度为A，载体为B

那么摩尔数要换算成1:10的话，那么就是 （A/2）*y /(B/1)=10/1.
y是你每1ul载体，所需要的加入的外源片段体积。
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14楼2014-11-22 17:18:44
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赵主动

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
15楼2015-07-01 10:40:46
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