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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA提取
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spiritdaisy

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA提取

为什么我提的DNA总是有蛋白污染？蛋白污染对PCR扩增有影响吗
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1楼2013-06-21 09:39:03
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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1949stone: 金币+1, 同意 2013-06-21 15:02:46
应该没啥事，不放心就再抽提一次~~分层后吸的时候小心点，宁缺毋滥
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-06-21 09:43:37
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spiritdaisy

新虫 (初入文坛)
我用氯仿异戊醇（24:1）抽提了两次的，那就是以后抽提了多一次？还有抽提的时候是不是要剧烈震荡？我那就是泡电泳以后胶孔里有条带，有蛋白污染可以直接PCR扩增吗？
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3楼2013-06-21 09:52:19
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甜甜520smile

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-21 13:53:28
不知道楼主使用传统方法提取的还是试剂盒的呢？
试剂盒的效果我觉得还是不错的，
如果存在蛋白质的话，可以做纯化
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4楼2013-06-21 11:29:06
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fhda142

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-21 13:53:36
跟氯仿异戊醇混合的时候肯定要剧烈震荡啊，离心完，吸上清的时候千万不要吸到分层的地方，否则就会有蛋白污染。。。
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5楼2013-06-21 13:22:10
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fhda142

铜虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-21 13:53:44
对pcr没什么影响，毕竟模板量加的很少。。。
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6楼2013-06-21 13:22:55
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
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1949stone: 回帖置顶 2013-06-21 15:03:12
1949stone: 金币+1, 同意 2013-06-21 15:03:18
有些蛋白会影响，会抑制taq酶活性，建议提dna时，抽提时候小心操作，宁可少吸点，不要把蛋白吸上来。做pcr时要事先测dna浓度，根据物种不同，适量加入。。过多过少都不好
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7楼2013-06-21 14:38:30
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
楼下的回答都很好 建议用试剂盒 靠谱
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海纳百川止于至善
8楼2013-06-21 15:04:27
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hxm007199

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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先用酚氯仿异戊醇提一遍，再用氯仿异戊醇，酚的去蛋白效果很好
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生可忍，熟不可忍！
9楼2013-06-21 15:06:23
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