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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮我看看我的PCR那可能出了状况~
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huanyi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-06-19 12:58:15
老实说我不太了解DGGE，所以二聚体会不会影响，我不敢说。

要是通过切胶回收纯化一下呢？肯定没有二聚体了，但是是否会对PAGE有影响就不知道了（我感觉没事）...

好的，谢谢啦~还是先试试吧，不行了再说。
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专注于最重要的那件事，但也不要拒绝其他的
11楼2013-06-19 14:20:34
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huanyi: 金币+5, ★有帮助, 囧，新手，我都不知道怎样算是正方向。受教了~~ 2013-06-19 19:33:41
哈哈，LZ 胶都不能调成正方向的，PCR 没什么问题，靠近点样孔的是片段，上面模糊的是二聚体
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
12楼2013-06-19 17:16:33
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evebobo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huanyi: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊~~我先做一个DGGE吧 2013-06-19 19:35:02
引物二聚体不会影响DGGE
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13楼2013-06-19 18:03:10
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huanyi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-19 17:16:33
哈哈，LZ 胶都不能调成正方向的，PCR 没什么问题，靠近点样孔的是片段，上面模糊的是二聚体

恩，再问一句，这样的情况能进行下一步的DGGE不，我这个引物已经有GC夹子了~~
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专注于最重要的那件事，但也不要拒绝其他的
14楼2013-06-19 19:34:27
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
huanyi: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢~我试试看要不要改变体系条件~ 2013-06-19 22:48:15
初次能做出这样感觉挺不错的了。不知这四条带代表的是什么，但第一条带与第三条带都有基因P出来，接下来可以先优化几次PCR体系温度条件，提高目的基因浓度。而消除引物二聚体的办法是用纯化试剂盒对PCR产物纯化处理或者体系中减少引物添加量。下次记得放Marker对照，这样可以一目了然看出你要的结果。
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要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
15楼2013-06-19 20:04:23
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