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huanyi

金虫 (小有名气)

[求助] 帮我看看我的PCR那可能出了状况~

大家好~本人初次接触微生物,老师要求做个菌群分析~
用的引物是古菌的109和518,这个PCR出来为什么这么模糊,背景也很白~我到目前为止不会看图,只是与别人的比觉得不好,没有达到目标效果。。大家能不能分析下?(没有mark,四个都是模板)
帮我看看我的PCR那可能出了状况~
第一次PCR.JPG
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
huanyi: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢~我试试看要不要改变体系条件~ 2013-06-19 22:48:15
初次能做出这样感觉挺不错的了。不知这四条带代表的是什么,但第一条带与第三条带都有基因P出来,接下来可以先优化几次PCR体系温度条件,提高目的基因浓度。而消除引物二聚体的办法是用纯化试剂盒对PCR产物纯化处理或者体系中减少引物添加量。下次记得放Marker对照,这样可以一目了然看出你要的结果。
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
15楼2013-06-19 20:04:23
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 严重同意 2013-06-19 07:05:27
我觉得挺好的啊, PCR的产物比较少所以曝光时间长了点造成图片的背景较强. 不过marker下次一定要带.
2楼2013-06-18 23:23:23
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 严重同意 2013-06-19 07:05:45
有引物二聚体,可以优化下减少二聚体,同时点mark ,确认大小
3楼2013-06-18 23:43:24
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huanyi

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-06-18 23:23:23
我觉得挺好的啊, PCR的产物比较少所以曝光时间长了点造成图片的背景较强. 不过marker下次一定要带.

这样可以吗?第一次做,老师又不懂,自己的分析,与别人比较觉得条带不亮,而且背景很白。我想着下一步做DGGE,不知道行不行。
专注于最重要的那件事,但也不要拒绝其他的
4楼2013-06-19 08:39:32
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