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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] IP结果求助

我用新鲜样品进行Co-IP实验，结果如图。其中左边两个是用与我的目的蛋白的抗体相同来源的IgG进行沉淀后上样再用目的蛋白的抗体进行western blot的结果，右边两个是用我的目的蛋白的抗体进行沉淀后上样再用目的蛋白的抗体进行western blot的结果。我的目的蛋白是42kD，IgG本身55kD，从图中都能看出来，但是用我的目的蛋白抗体进行显色，怎么会多出三条带来，求解？
IP结果求助
PRMT1-IP.jpg
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砖石王老三！！！
1楼 2013-06-17 09:48:41
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
顶一下，有没有人回答啊！
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砖石王老三！！！
2楼2013-06-17 10:52:25
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得是因为你IP 的样品中加的抗体多的原因。因为你可以发现你的IP样品55KD的IGG条带很强。所以会有更多的带子出来。你可以尝试将对照的抗体增多，我觉得对照也可以暴出来。
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天道酬勤
3楼2013-06-17 13:52:29
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wchuangqi at 2013-06-17 13:52:29
我觉得是因为你IP 的样品中加的抗体多的原因。因为你可以发现你的IP样品55KD的IGG条带很强。所以会有更多的带子出来。你可以尝试将对照的抗体增多，我觉得对照也可以暴出来。

请问对照也可以暴出来的原因是？谢谢！
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砖石王老三！！！
4楼2013-06-17 20:21:32
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better8392

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同学你好！
我觉得你箭头所指的三条带是非特异的带，因为左边两道也有至少靠下一点的两条带是有的，只是有点弱。正如三楼所说是因为你IGG和抗体加的量不一样，所以你才会看到到右边的带深一点，你以为是多出来的，其实本来就是，应该是IGG的非特异性结合所导致的。
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天行健君子以自强不息，地势坤君子以厚德载物
5楼2013-06-17 23:40:54
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by better8392 at 2013-06-17 23:40:54
同学你好！
我觉得你箭头所指的三条带是非特异的带，因为左边两道也有至少靠下一点的两条带是有的，只是有点弱。正如三楼所说是因为你IGG和抗体加的量不一样，所以你才会看到到右边的带深一点，你以为是多出来的， ...

嗯嗯...目前来看这是最好最合理的解释了！谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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砖石王老三！！！
6楼2013-06-18 00:16:39
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wchuangqi at 2013-06-17 13:52:29
我觉得是因为你IP 的样品中加的抗体多的原因。因为你可以发现你的IP样品55KD的IGG条带很强。所以会有更多的带子出来。你可以尝试将对照的抗体增多，我觉得对照也可以暴出来。

非特异条带呗。其实很多时候，western的结果并不能得到很单一的条带。因为western的灵敏度跟发光底物的灵敏性有很大关系。如果你用低灵敏度的底物，你可能得到一条单一的条带，但是当你换成高灵敏度的底物的时候或者延长曝光时间，你会发现很多非特异的条带也会出来。当然说到底可能还是因为抗体不够特异的原因。
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天道酬勤
7楼2013-06-19 13:28:59
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