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荧光偏振测定，blank孔的值很大，为什么？
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我是用Molecular Devices SpectraMax M5分光光度计测定溶液的荧光偏振强度，来分析蛋白质和荧光标记物的结合程度。 激发波长485，发射波长535 用的板子为标准96孔全黑色微孔板，读数方式是终点顶部读数。 测定时，出现的异常情况是 1. 随着蛋白浓度的提高，荧光偏振应该增大，结果却是减小，趋势很明显，正好和预期相反。 2. 测定了一下空白孔的荧光偏振值，里面什么都没加，完全是空的，其读数远高于样品的测定值，大约3倍于样品孔。 由于本人不是物理专业的，所以请教各位高手解决此问题，不胜感激。 另外还有一个疑问 文献报道都是测定的荧光各向异性（r），我此次是测定荧光偏振强度（P），因为条件所限，我们这台仪器只能测定荧光偏振强度（P），有文献报道，P和r的换算公式是 r=2*P/（3-P），不知道这样换算是否可行。 求解。。。。。 |
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 偏振 |
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