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xinwenwen

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光偏振测定,blank孔的值很大,为什么?

我是用Molecular Devices SpectraMax M5分光光度计测定溶液的荧光偏振强度,来分析蛋白质和荧光标记物的结合程度。
激发波长485,发射波长535
用的板子为标准96孔全黑色微孔板,读数方式是终点顶部读数。
测定时,出现的异常情况是
1. 随着蛋白浓度的提高,荧光偏振应该增大,结果却是减小,趋势很明显,正好和预期相反。
2. 测定了一下空白孔的荧光偏振值,里面什么都没加,完全是空的,其读数远高于样品的测定值,大约3倍于样品孔。
由于本人不是物理专业的,所以请教各位高手解决此问题,不胜感激。
另外还有一个疑问
文献报道都是测定的荧光各向异性(r),我此次是测定荧光偏振强度(P),因为条件所限,我们这台仪器只能测定荧光偏振强度(P),有文献报道,P和r的换算公式是
r=2*P/(3-P),不知道这样换算是否可行。
求解。。。。。
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chenglong_li

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

“测定了一下空白孔的荧光偏振值,里面什么都没加,完全是空的,其读数远高于样品的测定值,大约3倍于样品孔。”这个正常,可以测定一下空白孔的荧光强度,荧光强度不能超过5
PS 您是哪个高校的学生?
为天地立心,为生民立命,为往圣继绝学,为万世开太平。
2楼2013-07-05 17:25:34
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shanshan1992

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenglong_li at 2013-07-05 17:25:34
“测定了一下空白孔的荧光偏振值,里面什么都没加,完全是空的,其读数远高于样品的测定值,大约3倍于样品孔。”这个正常,可以测定一下空白孔的荧光强度,荧光强度不能超过5
PS 您是哪个高校的学生?

那这样的话,样品测定值就是负值了,也没有关系吗?
3楼2017-07-04 10:58:31
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lhhh001

新虫 (初入文坛)

4楼2021-06-02 08:58:59
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