24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 1088.2
散金: 119
红花: 7
帖子: 954
在线: 124.3小时
虫号: 1255578
注册: 2011-04-05
性别: MM
专业: 中药资源

[求助] 大牛来指点下啊~CDS区到底含不含内含子？看了相关的帖反而把我搞糊涂了

各位大侠，我要崩溃了，不是说我没之前没看过帖，而是看了帖之后把我搞混了。
   1 CDS区到时含不含内含子？有一个老师说不含，一个说含，我看了论坛，两种说法我都好像看过。我认为是不含的。
   2 如果CDS区不含内含子，有些基因在NCBI里查到的，标题上注明是全长CDS区，但下面的注释里却显示含有很多个CDS区，基因序列也显示含有多个CDS区，如图1，难道CDS区真含有内含子才是正解？但为什么我克隆了一个基因，反转录得到的，不含内含子了，获得的基因就跟图1情况一样，终止密码子还更多，导致多个CDS区存在，怎么会这样呢？如图2
   3 若在一个基因序列里，含有多个CDS区（就是在多个不同位置含终止密码子），连接到表达载体是不是指翻译其识别的第一个CDS？

1.jpg

2.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

思路决定出路。。。

1楼 2013-06-14 16:15:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 1088.2
散金: 119
红花: 7
帖子: 954
在线: 124.3小时
虫号: 1255578
注册: 2011-04-05
性别: MM
专业: 中药资源

引用回帖:

28楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-23 11:46:00
你的实验流程我没有完全看懂。可能是因为我做PT-PCR较少，比如我不懂你的RT-PCR流程中为什么要水解DNA？

我先就你的你的这贴讨论。在RT-PCR时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo(T)-Adaptor Prime ...

您好！看了您这么多回复，心存感激！谢谢！
RT-PCR时，将RNA反转录成cDNA 的引物可以使用Random 6 mers、Oligo dT Primer 或特异性下游引物。3种引物适用范围不同，特别是考虑到有些真核生物的mRNA不具有Poly（A）尾的问题，为使反转录完全，我RT时，将Random 6 mers、Oligo dT Primer同时使用了。
然后用特异性引物和上述反转录液扩增，得到的PCR产物，电泳结果与下图的目的片段1相同，对PCR产物T-A克隆，测序结果比对表明，自己扩了的是基因组序列。将内含子去掉之后，与引物设计的原模板（完整CDS区）比对，相似度很高。足以再次说明，自己扩的是含有内含子的基因组序列。