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lp147057101

铜虫 (初入文坛)

[求助] 戊二醛连NH2-DNA

我用APTES和DMOAP硅烷化玻片,然后在玻片上修饰了戊二醛,最后再连接氨基链,放置过夜都接不上,不知道是怎么回事,求指导
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富足生活,知足心态
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guisiliao

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


release53: 金币+1, 感谢应助 2013-11-04 11:12:40
干扰还好吧,首先在硅烷化之前先用浓硫酸和过氧化氢洗,形成一个亲水层,再来硅烷化修饰,效果会好一点,再用PB稀释的戊二醛浸泡2H左右就可以了,然后用大量超纯水冲洗,对了,在硅烷化修饰后还需要一个步骤,就是放入烘箱中烘30min,110度,这步是为了硅烷接合得更加牢靠。
接氨基DNA,我们都是在37度的湿盒中放置2H左右的,4度放置过夜也试过,效果差不多。
6楼2013-06-20 14:35:40
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zp199

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢交流,欢迎常来~ 2013-06-14 14:29:28
不知道LZ为啥要用DMOAP?DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基[3-(三甲氧基硅基)丙基]氯化铵?如果是的话,那么你的这个体系很有问题,APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了,即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应,使得末端修饰为醛基,但是由于空间位阻太大的原因,DNA没法和醛基反应。我建议你直接用APTES修饰玻片就行了,不要用DMOAP。
2楼2013-06-13 14:26:33
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guisiliao

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jx917 at 2013-11-02 22:03:30
我现在也在做这个方面,可是我完全是外行啊,能不能请大神说说戊二醛用多大浓度合适?万分感谢啊!!...

5%吧,用PBS稀释的,其他浓度我没有试过。
8楼2013-11-04 07:55:11
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普通回帖

lp147057101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zp199 at 2013-06-13 14:26:33
不知道LZ为啥要用DMOAP?DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基氯化铵?如果是的话,那么你的这个体系很有问题,APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了,即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应,使得末端修饰为醛基,但是由 ...

DMOAP是用来诱导液晶排列的,不用的话背景干扰会很大甚至分不清是背景干扰还是检测到的物质,以前也有师姐她们做过,接上去了,但现在不知道是什么原因接不上去
富足生活,知足心态
3楼2013-06-14 10:04:54
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花生鱼皮

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zp199 at 2013-06-13 14:26:33
不知道LZ为啥要用DMOAP?DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基氯化铵?如果是的话,那么你的这个体系很有问题,APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了,即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应,使得末端修饰为醛基,但是由 ...

直接用APTES硅烷化效率是不是很低?你怎么硅烷化的?我觉得效率很低.
4楼2013-06-17 09:29:21
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lp147057101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 花生鱼皮 at 2013-06-17 09:29:21
直接用APTES硅烷化效率是不是很低?你怎么硅烷化的?我觉得效率很低....

这样背景干扰太大了,现在的问题是APTES的氨基跟后面的戊二醛中的醛基连接不上,找不到原因
富足生活,知足心态
5楼2013-06-20 09:07:05
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jx917

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by guisiliao at 2013-06-20 14:35:40
干扰还好吧,首先在硅烷化之前先用浓硫酸和过氧化氢洗,形成一个亲水层,再来硅烷化修饰,效果会好一点,再用PB稀释的戊二醛浸泡2H左右就可以了,然后用大量超纯水冲洗,对了,在硅烷化修饰后还需要一个步骤,就是放 ...

我现在也在做这个方面,可是我完全是外行啊,能不能请大神说说戊二醛用多大浓度合适?万分感谢啊!!
7楼2013-11-02 22:03:30
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jx917

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by guisiliao at 2013-11-04 07:55:11
5%吧,用PBS稀释的,其他浓度我没有试过。...

非常感谢
9楼2013-11-04 19:47:55
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良衍写意2011

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zp199 at 2013-06-13 14:26:33
不知道LZ为啥要用DMOAP?DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基氯化铵?如果是的话,那么你的这个体系很有问题,APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了,即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应,使得末端修饰为醛基,但是由 ...

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6005232&fpage=1我也在做这个实验,请问你修饰完戊二醛后,玻片吹干后是透明的吗?我的怎么一用氮气吹干就不透明了呢?像一层不均匀的薄膜,之前APTES后都是透明的。请指教。
10楼2014-03-06 18:48:23
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