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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » 戊二醛连NH2-DNA
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lp147057101

铜虫 (初入文坛)

[求助] 戊二醛连NH2-DNA

我用APTES和DMOAP硅烷化玻片，然后在玻片上修饰了戊二醛，最后再连接氨基链，放置过夜都接不上，不知道是怎么回事，求指导
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富足生活，知足心态
1楼 2013-06-13 10:26:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

guisiliao

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
release53: 金币+1, 感谢应助 2013-11-04 11:12:40
干扰还好吧，首先在硅烷化之前先用浓硫酸和过氧化氢洗，形成一个亲水层，再来硅烷化修饰，效果会好一点，再用PB稀释的戊二醛浸泡2H左右就可以了，然后用大量超纯水冲洗，对了，在硅烷化修饰后还需要一个步骤，就是放入烘箱中烘30min，110度，这步是为了硅烷接合得更加牢靠。
接氨基DNA，我们都是在37度的湿盒中放置2H左右的，4度放置过夜也试过，效果差不多。
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6楼2013-06-20 14:35:40
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zp199

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-06-14 14:29:28
不知道LZ为啥要用DMOAP？DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基[3-(三甲氧基硅基)丙基]氯化铵？如果是的话，那么你的这个体系很有问题，APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了，即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应，使得末端修饰为醛基，但是由于空间位阻太大的原因，DNA没法和醛基反应。我建议你直接用APTES修饰玻片就行了，不要用DMOAP。
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2楼2013-06-13 14:26:33
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guisiliao

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jx917 at 2013-11-02 22:03:30
我现在也在做这个方面，可是我完全是外行啊，能不能请大神说说戊二醛用多大浓度合适？万分感谢啊！！...

5%吧，用PBS稀释的，其他浓度我没有试过。
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8楼2013-11-04 07:55:11
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普通回帖

lp147057101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zp199 at 2013-06-13 14:26:33
不知道LZ为啥要用DMOAP？DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基氯化铵？如果是的话，那么你的这个体系很有问题，APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了，即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应，使得末端修饰为醛基，但是由 ...

DMOAP是用来诱导液晶排列的，不用的话背景干扰会很大甚至分不清是背景干扰还是检测到的物质，以前也有师姐她们做过，接上去了，但现在不知道是什么原因接不上去
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富足生活，知足心态
3楼2013-06-14 10:04:54
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花生鱼皮

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zp199 at 2013-06-13 14:26:33
不知道LZ为啥要用DMOAP？DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基氯化铵？如果是的话，那么你的这个体系很有问题，APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了，即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应，使得末端修饰为醛基，但是由 ...

直接用APTES硅烷化效率是不是很低?你怎么硅烷化的?我觉得效率很低.
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4楼2013-06-17 09:29:21
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lp147057101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 花生鱼皮 at 2013-06-17 09:29:21
直接用APTES硅烷化效率是不是很低?你怎么硅烷化的?我觉得效率很低....

这样背景干扰太大了，现在的问题是APTES的氨基跟后面的戊二醛中的醛基连接不上，找不到原因
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富足生活，知足心态
5楼2013-06-20 09:07:05
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jx917

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by guisiliao at 2013-06-20 14:35:40
干扰还好吧，首先在硅烷化之前先用浓硫酸和过氧化氢洗，形成一个亲水层，再来硅烷化修饰，效果会好一点，再用PB稀释的戊二醛浸泡2H左右就可以了，然后用大量超纯水冲洗，对了，在硅烷化修饰后还需要一个步骤，就是放 ...

我现在也在做这个方面，可是我完全是外行啊，能不能请大神说说戊二醛用多大浓度合适？万分感谢啊！！
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7楼2013-11-02 22:03:30
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jx917

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by guisiliao at 2013-11-04 07:55:11
5%吧，用PBS稀释的，其他浓度我没有试过。...

非常感谢
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9楼2013-11-04 19:47:55
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良衍写意2011

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zp199 at 2013-06-13 14:26:33
不知道LZ为啥要用DMOAP？DMOAP的全称是不是二甲基十八烷基氯化铵？如果是的话，那么你的这个体系很有问题，APTES的烷基链比DMOAP的烷基链短太多了，即使戊二醛和APTES的氨基发生了反应，使得末端修饰为醛基，但是由 ...

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6005232&fpage=1我也在做这个实验，请问你修饰完戊二醛后，玻片吹干后是透明的吗？我的怎么一用氮气吹干就不透明了呢？像一层不均匀的薄膜，之前APTES后都是透明的。请指教。
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10楼2014-03-06 18:48:23
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