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yhdchina

新虫 (初入文坛)

[交流] 怎样能得到高纯度的蛋白? 已有4人参与

我用Ni离子亲和层析纯化融合蛋白,6个His标签在载体端,然后柱上用肠激酶4°C过夜将载体与目的多肽切开,纯化得到我的目的多肽(约4.2KDa),此多肽是存在于肠激酶缓冲液中的。在中科新生命用RP-HPLC测纯度只有50%,不知道怎么回事,怎样能得到纯度>95%的蛋白呢?
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欧阳-90

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我没做过多肽纯化,但是也做过一个5KD大小的蛋白纯化。纯化的话样品的前处理很重要,对结合能力影响很大,而且一个镍柱的纯化纯度肯定达不到要求。可以考虑镍柱之后过疏水或者离子交换层析。最后分子筛,
11楼2013-06-14 23:12:10
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